实时定量RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARa融合基因 |
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引用本文: | 郎丽,李惠民,刘华,王义民,张学美.实时定量RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARa融合基因[J].中国实验血液学杂志,2007,15(4):714-719. |
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作者姓名: | 郎丽 李惠民 刘华 王义民 张学美 |
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作者单位: | 1. 广东省职业病防治院 2. 云南省第二人民医院血液科,昆明,650021 3. 昆明医学院第一附属医院检验科,昆明,650031 4. 昆明医学院第一附属医院血液科,昆明,650031 |
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基金项目: | 云南省第二人民医院资助项目 |
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摘 要: | 本研究旨在建立用实时定量RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARa mRNA的方法,探讨APLPML-RARa融合基因表达水平与疗效的关系。用RT-PCR扩增培养的NB4细胞的PML-RARa融合基因,取1μgNB4细胞的总cDNA进行10倍的梯度稀释,作为标准品,建立荧光定量RT-PCR方法,对方法的灵敏性、稳定性、重复性进行了测定。定量检测4例急性早幼粒细胞白血病(APL)患者治疗前后骨髓内PML-RARa融合基因转录本水平,并对1例经治疗完全缓解后又复发的患者PML-RARa转录本水平(拷贝数)进行动态监测。结果表明:用本研究建立的实时定量RT-PCR方法可检测出10-5μgNB4细胞cDNA中的PML-RARa融合基因,其重复性的CT值,管间、批间变异系数(CV)分别为2.1%、3.8%。4例患者初治骨髓PML-RARa基因转录本水平的分别为1884、5533、1803、4677拷贝,平均为3475拷贝。经ATRA+化疗治疗后其PML-RARa基因转录水平下降至40、135、79、229拷贝,平均为121拷贝。还有1例患者治疗前PML-RARa基因转录本水平为8600拷贝,经过4个月治疗,虽然此时患者处于完全缓解期,但其转录水平拷贝数仍有730。3个月后患者出现复发,转录本水平升至为11000拷贝。经过ATRA+化疗治疗后转录本水平又逐渐下降至1200拷贝。结论;建立的实时定量RT-PCR灵敏、重复性好。治疗后APL患者的PML-RARa融合基因转录本水平明显下降,复发时基因转录本水平又升高。融合基因表达水平的改变与临床疾病进展关系一致,这有助于监测白血病微小残留病,评价疗效及判断预后。
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关 键 词: | 实时定量RT-PCR 急性早幼粒细胞白血病 PML/RARa融合基因 微小残留病灶 |
文章编号: | 1009-2137(2007)04-0714-06 |
修稿时间: | 2006-07-27 |
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