| Rac1-GTPase慢病毒的构建及生物学活性鉴定 |
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| 引用本文： | 王斌,李娟,张磊,张琳,张璐. Rac1-GTPase慢病毒的构建及生物学活性鉴定[J]. 南方医科大学学报, 2010, 30(2): 197 |
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| 作者姓名： | 王斌 李娟 张磊 张琳 张璐 |
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| 作者单位： | 南方医科大学病理生理学教研室/广东省功能蛋白质组学重点实验室,广东,广州,510515;南方医科大学组织学与胚胎学教研室,广东,广州,510515 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30770821);;广东省自然科学基金重点项目(92510515000008);;广州市科技计划项目(2007Z3-E0551);;广东省科技计划项目(2005B50301010) |
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| 摘 要： | 目的构建携带绿色荧光蛋白的Rac1-GTPase显性负效突变体(Rac1N17)和组成型活性突变体(Rac1L61)的慢病毒。方法构建Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒,并以酶切和测序等方法鉴定。利用ViraPowerTM慢病毒表达系统包装制备Rac1-GTPase突变体慢病毒上清,用其感染大鼠前皮质神经元,分别进行Rac1生物学活性检测、细胞转染效率鉴定与神经元形态学观察。结果构建的Rac1N17和Rac1L61慢病毒表达质粒经酶切与测序鉴定正确,包装的慢病毒滴度为1×106TU/ml。用制备的慢病毒上清感染原代培养的前皮质神经元,Rac1生物学活性检测结果显示Rac1N17慢病毒显著抑制表皮生长因子诱导的Rac1活性的升高,而Rac1L61慢病毒感染神经元Rac1活性显著升高。感染效率鉴定显示病毒上清可感染80%以上的前皮质神经元。形态学观察显示经慢病毒感染后的神经元其胞体与树突分支清晰可见。结论成功制备了Rac1N17和Rac1L61慢病毒,并成功实现了慢病毒感染前皮质神经元,为进一步研究Rho蛋白家族信号通路提供了一个重要工具。
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| 关 键 词： | Rac1-GTPase 慢病毒 绿色荧光蛋白 生物学活性 |
Construction and identification of Rac1-GTPase lentivirus |
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| WANG Bin,LI Juan,ZHANG Lei,ZHANG Lin,ZHANG Lu. Construction and identification of Rac1-GTPase lentivirus[J]. Journal of Southern Medical University, 2010, 30(2): 197 |
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| Authors: | WANG Bin LI Juan ZHANG Lei ZHANG Lin ZHANG Lu |
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| Affiliation: | WANG Bin1,LI Juan1,ZHANG Lei1,ZHANG Lin2,ZHANG Lu1 1Department of Pathophysiology , Key Laboratory of Proteomics of Guangdong Province,2Department of Histology , Embryology,Southern Medical University,Guangzhou 510515,China |
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| Abstract: | Objective To construct lentiviruses carrying dominant negative mutant of Rac1-GTPase(Rac1N17) or the constitutive active mutant of Rac1-GTPase(Rac1L61) and expressing enhanced green fluorescent protein(EGFP) bicistronically.Methods The lentiviral expression plasmid Plenti6/v5-Rac1N17 and Plenti6/v5-Rac1L61 were constructed and identified by restriction enzyme digestion and DNA sequence analysis.The two plasmids were packaged using the ViraPowerTM lentiviral expression system to produce replication-incompete... |
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| Keywords: | Rac1-GTPase lentivirus green fluorescent protein biological activity |
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