人脐带间充质干细胞的人转化生长因子β3基因稳定表达系统的构建

目的：探讨构建人脐带间充质干细胞（huMSCs）的人转化生长因子（hTGF）β3基因稳定表达系统的可行性,为进一步探讨创面治疗的研究打下基础。方法：用组织贴壁法原代培养huMSCs,流式细胞术（FCM）鉴定细胞表面抗原CD29、34、44、45和80,用脂质体介导的转染技术将人pcDNA3.1（-）/TGF-β3重组质粒转染进入huMSCs,并用G418进行筛选得到单克隆细胞,扩增后得到稳定表达人TGF-β3细胞株,逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学技术检测转染前、后及筛选前、后细胞内TGF-β3基因表达,再次采用FCM检测细胞表面抗原表达变化,最后Western blot检测稳定表达组及未转染huMSCs的TGF-β3蛋白表达。结果：原代培养的HuMSCs中约70%的细胞表达表面抗原CD29、44,而绝大部分不表达CD34、45和80,原代培养的细胞符合huMSCs特性。免疫细胞化学染色显示瞬时转染率为（10.0±0.2）%,稳定转染率（85.0±0.7）%（P〈0.05）,RT-PCR、Western blot显示转染并通过G418筛选的huMSCs高表达hTGF-β3,转染hTGF-β3基因的huMSCs其表面抗原与未转染前保持一致。结论：HuMSCs的hTGF-β3基因稳定表达系统构建成功,转染hTGF-β3基因的huMSCs体外培养条件下仍保持干细胞特性。