| 利用Crispr/Cas9构建POMP基因组原位荧光报告系统及其应用 |
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| 引用本文： | 赵湘湘,沈俊杰,彭维,蒋璐频,钱程. 利用Crispr/Cas9构建POMP基因组原位荧光报告系统及其应用[J]. 第三军医大学学报, 2016, 0(2): 141-147. DOI: 10.16016/j.1000-5404.201506008 |
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| 作者姓名： | 赵湘湘 沈俊杰 彭维 蒋璐频 钱程 |
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| 作者单位： | 1. 浙江理工大学生命科学学院,杭州,310018;2. 第三军医大学西南医院全军临床病理学研究所,重庆,400038 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(81472292)Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China (81472292). |
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| 摘 要： | 目的 利用Crispr/Cas9系统建立蛋白酶体成熟蛋白(proteasome maturation protein,POMP)基因组原位荧光报告系统.方法 构建POMP-2A-mCherry-T载体并转染HEK293(human embryonic kdiney 293 cell)细胞;流式细胞仪分选获取mCherry阴阳性细胞;实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR)检测mCherry阴阳性细胞中POMP基因转录水平表达差异;Western blot检测mCherry阴阳性细胞中POMP蛋白表达差异以及Huh7细胞中JNK1/JNK2磷酸化水平;蛋白酶体活性试剂盒检测mCherry阴阳性细胞中蛋白酶体活性差异.结果 mCherry阳性细胞POMP蛋白表达水平比mCherry阴性细胞高1.3倍(P＜0.01),但其基因转录水平差异并不显著(P＞0.05);同时mCherry阴性细胞中泛素化水平比mCherry阳性细胞高1.2倍(P＜0.01);另外mCherry阳性细胞中蛋白酶体活性也显著高于阴性细胞(P＜0.01);低表达POMP的Huh7细胞中,JNK1和JNK2的磷酸化水平分别升高1.5倍和1.4倍(P＜0.01).结论 成功构建POMP荧光报告系统;将该系统用于Huh7细胞,发现POMP可改变JNK1、JNK2磷酸化水平,其可能通过JNK信号通路来影响细胞的增殖以及凋亡.
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| 关 键 词： | Crispr/Cas9 蛋白酶体成熟蛋白 mCherry HEK293 |
Construction of mCherry reporter system of POMP by Crispr/Cas9 and its application |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Crispr/Cas9 proteasome maturation protein mCherry HEK293 |
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