| 类鼻疽杆菌毒素分子BLF1的重组表达及生物学活性 |
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| 引用本文： | 任春艳,方瑶,李倩,胡艺,马腾飞,胡治强,袁顺翎,周杰,汪黎鸿.类鼻疽杆菌毒素分子BLF1的重组表达及生物学活性[J].第三军医大学学报,2016(11):1215-1219. |
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| 作者姓名： | 任春艳 方瑶 李倩 胡艺 马腾飞 胡治强 袁顺翎 周杰 汪黎鸿 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室,重庆,400038 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(81471914)Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China (81471914). |
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| 摘 要： | 目的 重组、表达类鼻疽杆菌毒素BLF1并研究其生物学活性.方法 运用DNA重组技术,以pGEX为表达系统在大肠杆菌中表达BLF1蛋白;以纯化重组蛋白rBLF1免疫新西兰大白兔,获得抗rBLF1血清,Western blot及ELISA鉴定抗血清;不同浓度rBLF1蛋白腹腔注射BALB/c小鼠,观察小鼠生存率;A549细胞模型中,通过CCK-8实验研究目的蛋白的细胞毒性效应及抗体阻断作用.结果 从类鼻疽杆菌基因组DNA中PCR得到了BLF1目的基因,连接到pGEX-6p-2质粒,经双酶切及测序表明重组质粒构建成功.GST-BLF1蛋白经诱导表达、酶切纯化得到了相对分子质量为23×103的高纯度rBLF1,免疫家兔抗血清ELISA效价达1∶1 280 000,Western blot鉴定在目的蛋白位置处出现特异印记条带.重组rBLF1蛋白腹腔注射BALB/c小鼠,小鼠死亡率与蛋白剂量呈正相关.rBLF1蛋白能明显杀伤A549细胞,抗体可有效阻断其杀伤作用.结论 成功重组表达了具有生物活性的rBLF1,该蛋白具有明显杀伤A549肿瘤细胞的作用,同时能够导致小鼠死亡但表现出一定耐受性.
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| 关 键 词： | 类鼻疽杆菌 BLF1蛋白 毒素 细胞毒性 |
Recombinant expression and biological characterization of Burkholderia pseudomallei toxin BLF1 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Burkholderia pseudomallei BLF1 protein toxin cytotoxicity |
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