| 鼠抗寻常性天疱疮抗原噬菌体抗体库的构建与筛选 |
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| 引用本文： | 薛峰,潘萌,李卫平,郑捷. 鼠抗寻常性天疱疮抗原噬菌体抗体库的构建与筛选[J]. 中国免疫学杂志, 2002, 18(9): 661-664 |
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| 作者姓名： | 薛峰 潘萌 李卫平 郑捷 |
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| 作者单位： | 上海市第二医科大学瑞金医院皮肤科,上海,200025 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (3 9870 665 ) |
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| 摘 要： | 目的 :应用重组噬菌体抗体库技术制备抗寻常性天疱疮抗原 (PVA)的单链抗体。方法 :用PVA免疫小鼠 6w后 ,抽取小鼠脾脏细胞RNA ,逆转录为cDNA。设计针对小鼠抗体重链可变区 (VH)和轻链可变区 (VL)的特异性引物 ,PCR扩增出VH 和VL 片段。用带有VH3′端、连接肽和VL5′端序列的引物修饰VL 得VL′后 ,与VH 进行重叠延伸拼接 (splicingbyoverlapex tension ,SOE) ,连接成VH—Linker—VL(ScFv) ,并大量扩增。此ScFv经限制性内切酶Sfi1和Not1酶切后 ,以噬粒pCANTAB 5E为载体 ,构建重组质粒 ,转导TG1 感受态菌 ,建成库容为 1 5× 10 6 的噬菌体抗体库 ,用PVA筛库。结果 :构建了抗PVA的特异性单链抗体库 ,筛选出一高丰度表达单链抗PVA抗体的细胞株。结论 :从小鼠噬菌体抗体库中获得特异性的、单克隆的、单链抗PVA噬菌体抗体
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| 关 键 词： | 寻常性天疱疮抗原 噬菌体抗体库 抗寻常性天疱疮抗体 |
| 文章编号： | 1000-484X(2002)09-0661-04 |
The construction and bio-panning of mouse ScFv phage-displayed antibody library against pemphigus vulgaris antigen |
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| XUE Feng,PAN Meng,LI Wei Ping et al. The construction and bio-panning of mouse ScFv phage-displayed antibody library against pemphigus vulgaris antigen[J]. Chinese Journal of Immunology, 2002, 18(9): 661-664 |
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| Authors: | XUE Feng PAN Meng LI Wei Ping et al |
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| Affiliation: | XUE Feng,PAN Meng,LI Wei Ping et al Department of Dermatology,Ruijin Hospital,Shanghai Second Medical University,Shanghai 200025 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pemphigus antigen Phage antibody library ScFv |
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