| 镉离子单克隆抗体的鉴定及竞争ELISA的建立 |
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| 引用本文： | 唐勇,王建华,向军俭,王宏,邓宁,杨红宇.镉离子单克隆抗体的鉴定及竞争ELISA的建立[J].免疫学杂志,2009,25(2). |
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| 作者姓名： | 唐勇 王建华 向军俭 王宏 邓宁 杨红宇 |
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| 作者单位： | 暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心,广州,510632
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| 基金项目： | 广东省科技计划面上项目，国家科技支撑计划项目子项目 |
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| 摘 要： | 目的 制备Cd2+单克隆抗体(McAbs,单抗),建立Cd2+ 间接竞争酶免疫学检测方法 (EHSA).方法 利用双功能螯合剂iEDTA将Cd2+分别与血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备免疫抗原和检测抗原.免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术制备抗Cd2+的单抗.鉴定单抗的效价、特异性、亚类及亲和力.以该抗体为基础建立检测镉离子的间接竞争ELISA方法 ,分析该方法 的灵敏度、检测限、工作范围.结果 成功制备出Cd-iEDTA-KLH和Cd-iEDTA-BSA偶联物;筛选出一株稳定分泌抗Cd-iEDTA单抗的杂交瘤细胞株C2G5该细胞株分泌的抗体亚类为IgG1,腹水抗体效价为1×106,相对亲和力结合常数Ka为1.6×109 L/mol.特异性结果 显示,除Hg2+外,该抗体与Ph2+、Fe3+、Mn2+、Mg2+、Zn2+、Al3+、Ni2+、Ca2+、Cu2+等金属离子的交叉反应低.建立了检测镉离子的间接竞争ELISA方法 ,该方法 的检测限为10 ng/mL,IC50为250 ng/mL.结论 建立了镉离子的竞争ELISA检测方法 ,检测限达到无公害水产品的国家标准(100 ng/g).
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| 关 键 词： | 镉离子 单克隆抗体 竞争ELISA |
Establishment of competitive enzyme-linked immunoassay for cadmium ions detection by using the McAbs against cadmium |
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| TANG Yong,WANG Jianhua,XIANG Junjian,WANG Hong,DENG Ning,YANG Hongyu Immunology , Antibody Engineering Center,Jinan University,Guangzhou ,China.Establishment of competitive enzyme-linked immunoassay for cadmium ions detection by using the McAbs against cadmium[J].Immunological Journal,2009,25(2). |
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| Authors: | TANG Yong WANG Jianhua XIANG Junjian WANG Hong DENG Ning YANG Hongyu Immunology Antibody Engineering Center Jinan University Guangzhou China |
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| Institution: | TANG Yong,WANG Jianhua,XIANG Junjian,WANG Hong,DENG Ning,YANG Hongyu Immunology , Antibody Engineering Center,Jinan University,Guangzhou 510632,China |
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| Abstract: | Objective To establish an indirect-competitive enzyme-linked immunoassay for cadmium ions by using the McAbs against cadmium.Methods To gain the complete immune-antigen(Cd-iEDTA-KLH)and detecting antigen(Cd-iEDTA-BSA),ion cadmium was chelated with isothiocyanobenzyl-EDTA(iEDTA)and linked with KLH and BSA,respectively.The Cd-iEDTA-KLH conjugates were used to immunize Balb/c mice and McAbs against ion cadmium were produced through general hybridoma technology.The titer,subtype,affinity,and specificity of the ... |
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| Keywords: | ion cadmium competitive ELISA monoclonal antibody |
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