| bcl-2 shRNA表达载体的构建及其在K562细胞中的干扰作用研究 |
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| 引用本文： | 李君君,颜家运,刘劼,黄丽芳. bcl-2 shRNA表达载体的构建及其在K562细胞中的干扰作用研究[J]. 中国现代医学杂志, 2008, 18(7): 869-872 |
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| 作者姓名： | 李君君 颜家运 刘劼 黄丽芳 |
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| 作者单位： | 1. 南华大学附属第一医院,血液科,湖南,衡阳,421001
2. 南华大学病原微生物研究室,湖南,衡阳,421001 |
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| 摘 要： | 目的构建bcl-2shRNA表达载体，观察其在人白血病K562细胞系中对bcl-2基因的干扰作用。方法设计合成有短发夹结构靶位bcl-2基因的65个碱基的寡核苷酸，连接到载体pSIREN-Shuttle（pSS），构建了bcl-2shRNA表达载体，得到重组质粒pSS-shbcl-2-1、pSS-shbcl-2-2、pSS-shbcl-2-3和一个阴性对照，将其稳定转染K562细胞，分别用RT-PCR、Western-blot法检测转染后K562细胞bcl-2mRNA及蛋白质表达水平。结果成功构建了bcl-2shRNA的表达载体，并筛选到转染后K562细胞在pSS-shbcl-2-3组bcl-2基因的mRNA和蛋白质表达水平明显抑制。结论特异性的bcl-2shRMA可以干扰K562细胞中bcl-2基因的表达，针对bcl-2基因不同位点的不同shRNA也有干扰效果的差异。
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| 关 键 词： | RNA干扰 基因bc1-2 细胞系 K562 shRNA 表达载体的构建 细胞 干扰作用 研究 cells expression vector effect interfering study 差异 干扰效果 同位点 筛选 结果 表达水平 蛋白质 mRNA 稳定转染 检测 |
| 文章编号： | 1005-8982(2008)07-0869-04 |
| 修稿时间： | 2007-10-20 |
Construction of bcl-2 shRNA expression vector and study on the interfering effect of bcl-2 shRNA expression vector in K562 cells |
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| LI Jun-jun,YAN jia-yun,LIU jie,HUANG Li-fang. Construction of bcl-2 shRNA expression vector and study on the interfering effect of bcl-2 shRNA expression vector in K562 cells[J]. China Journal of Modern Medicine, 2008, 18(7): 869-872 |
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| Authors: | LI Jun-jun YAN jia-yun LIU jie HUANG Li-fang |
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| Affiliation: | LI Jun-jun1,YAN jia-yun1,LIU jie2,HUANG Li-fang1 (1.Department of Hematology,the First Affiliated Hospital,Nanhua University,Hengyang,Hunan 421001,P.R.China,2. Microbiology Research Section,P.R.China ) |
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| Abstract: | [Objective] To construct short hairpin RNA interfering (shRNA) expression vector of bcl-2, and detect the specific interfering effect of bcl-2 shRNA expression vector on human leukemia K562 cells. [Methods] Oligos of 65 base pairs for short hairpin RNA targeting for bcl-2 were designed and connected to the expression vector pSIREN-Shuttle(pSS) to construct the bcl-2 shRNA expression vectors. The recombinant plasmid pSS-sh-bcl-2-1, pSS-sh-bcl-2-2, pSS-sh-bcl-2-3 were generated and transfected into K562 cells... |
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| Keywords: | RNA interfering gene bcl-2 cell line K562 |
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