| 突变型人胰岛素原基因的克隆及其腺病毒载体的构建 |
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| 引用本文： | 石琳,陈振萍,袁向飞,杨少光,张宇光,韩忠朝.突变型人胰岛素原基因的克隆及其腺病毒载体的构建[J].细胞与分子免疫学杂志,2008,24(5):529-531. |
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| 作者姓名： | 石琳 陈振萍 袁向飞 杨少光 张宇光 韩忠朝 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所,血液病医院,天津,300020 |
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| 摘 要： | 目的:构建含有定点突变的人胰岛素原基因的腺病毒表达载体.方法:首先利用RT-PCR方法从正常流产胎儿胰腺组织获取野生型人胰岛素原eDNA;然后通过重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上产生2个突变位点,使突变的eDNA编码的蛋白质含弗林蛋白酶的识别位点,该突变型胰岛素原cDNA片段命名为INS-M2;最后将INS-M2亚克隆至腺病毒载体系统的穿梭载体的多克隆位点上,并与骨架载体共转染至细菌内,通过细菌内同源重组得到重组载体.结果:HindⅢ和Xho I酶切、Poc I酶切及测序均证实载体pAd-INS-M2构建成功.结论:构建的含定点突变人胰岛素原基因腺病毒载体pAd-INS-M2为进一步转染非胰岛β细胞,对糖尿病进行基因治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 胰岛素原 腺病毒载体/pAdEasy-1 弗林蛋白酶 突变型 人胰岛素原 基因治疗 多克隆 糖尿病 胰岛β细胞 共转染 毒载体 测序 酶切 结果 重组载体 细菌内同源重组 骨架 穿梭载体 载体系统 亚克隆 命名 识别 蛋白酶 |
| 文章编号： | 1007-8738(2008)05-0529-03 |
| 修稿时间： | 2007年11月27 |
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