| 人microRNA-339慢病毒载体的构建及其对结肠癌细胞SW620迁移的影响 |
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| 引用本文： | 周畅,陈芳,陆艳霞,袁理,李学农.人microRNA-339慢病毒载体的构建及其对结肠癌细胞SW620迁移的影响[J].安徽医科大学学报,2014,49(11). |
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| 作者姓名： | 周畅 陈芳 陆艳霞 袁理 李学农 |
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| 作者单位： | 1. 广东药学院人体解剖学教研室,广州510006;南方医科大学病理学系,广东省分子肿瘤病理学重点实验室,广州510515
2. 南方医科大学病理学系,广东省分子肿瘤病理学重点实验室,广州510515 |
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| 摘 要： | 目的 构建人microRNA-339(has-miR-339)慢病毒载体,并探讨miR-339-5p/3p对结肠癌细胞SW620迁移能力的影响.方法 由miRBase及NCBI数据库查找获得miR-339前体序列(pre-miR-339)及其侧翼序列,将pre-miR-339和PLVTHM载体经双酶切后连接,产生PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体,并经测序鉴定;以PLVTHM-pre-miR-339、psPAX2和pMD2.G三质粒包装系统共同转染293FT细胞,包装产生慢病毒.流式细胞仪筛选建立稳定过表达pre-miR-339的SW620细胞株,实时荧光定量RT-PCR检测miR-339-5p及miR-339-3p表达.利用细胞划痕实验进行细胞迁移能力检测.结果 成功构建PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体,测序证实所插入基因序列完全正确.倒置荧光显微镜下观察可见转染后的293FT细胞及SW620细胞均表达绿色荧光.在过表达pre-miR-339的SW620亚细胞系中,miR-3396p及miR-339-3p表达水平显著高于空载对照组.划痕实验结果显示:与SW620/PLVTHM-NC组相比,SW620/PLVTHM-pre-miR-339组细胞迁移减缓,划痕较宽.结论 成功构建了PLVTHM-pre-miR-339慢病毒载体和稳定过表达miR-3396p及miR-339-3p的SW620亚细胞系,并证实miR-339-5p/3p可抑制结肠癌细胞SW620的迁移能力.
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| 关 键 词： | miR-339 结肠癌 慢病毒载体 细胞迁移 |
Construction of human microRNA-339 lentivirus vector and its effect on migration of SW620 colon cancer cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | miR-339 colorectal cancer lentiviral expression vector migration |
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