| 摘 要： | 目的:通过用幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、环巴胺(cyclopamine)分别或联合作用于胃癌细胞AGS后,观察刺猬蛋白(sonic hedgehog,Shh)信号通路中相关蛋白Ptch-1、Gli的表达变化,并探讨其意义.方法:(1)不同浓度H.pylori LPS作用于AGS细胞24 h,Western blot检测Ptch-1、Gli的表达,找到最佳刺激浓度.以最佳刺激浓度分别作用于AGS细胞24、48、72 h,Western blot法检测Ptch-1、Gli的表达;(2)不同浓度环巴胺作用于AGS细胞24 h后,MTT法检测对AGS的抑制率,求得半数抑制浓度(50%concentration of inhibition,IC50).以环巴胺IC50作用AGS细胞24、48、72 h后,Western blot检测Ptch-1、Gli的表达;(3)AGS细胞培养后分3组,分别用H.pylori LPS、环巴胺、H.pylori LPS+环巴胺作用AGS细胞24 h,另设阴性对照组,应用Western blot法对各组细胞中Shh信号通路相关蛋白Ptch-1、Gli的表达水平进行检测.结果:不同浓度H.pylori LPS作用于AGS细胞24 h后Ptch-1、Gli的表达升高,且随着浓度增加,表达逐渐增高(P0.05),最终达到一个平台期,以平台期浓度作为最佳刺激浓度,分别刺激AGS细胞24、48、72 h,Western blot结果显示,Ptch-1、Gli的表达逐渐升高,呈时间依赖性(P0.05);不同浓度环巴胺作用于AGS细胞24 h后,MTT结果显示环巴胺对AGS的抑制作用呈浓度依赖性(P0.05);以环巴胺IC50作用AGS细胞24 h后,Western blot结果显示随着时间的延长,Gli的表达逐渐减低,而Ptch-1的表达无显著性差异.H.pylori LPS、环巴胺、H.pylori LPS+环巴胺组分别作用于AGS细胞24 h后,H.pylori LPS+环巴胺联合作用组的Ptch-1表达高于对照组及环巴胺组(P0.05),而与H.pylori LPS组无统计学差异;H.pylori LPS+环巴胺联合作用组Gli的表达低于对照组和H.pylori LPS组(P0.05),与环巴胺组无统计学差异.结论:H.pylori通过其毒力因子LPS能够影响胃癌细胞AGS的Shh信号通路相关蛋白的表达.环巴胺可通过抑制Shh信号通路抑制胃癌细胞AGS的生长.H.pylori LPS可能通过影响Shh信号通路的上游分子发挥作用.
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