基于AngⅡ/AT1R/NOX4信号通路探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭肾间质纤维化机制

目的 通过观察加味真武汤对腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭（CRF）大鼠血清及肾组织中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）、还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶4（NOX4）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、Ⅰ型胶原蛋白（COL1A1）、Ⅲ型胶原蛋白（COL3A1）表达的影响，探讨加味真武汤延缓CRF肾间质纤维化的可能作用机制。方法 将50只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组10只、造模组40只，将大鼠适应性饲养1周后采用腺嘌呤150 mg·kg^-1·d^-1灌胃的方法建立实验性CRF大鼠模型。造模完成后随机选取正常组和造模组大鼠各3只取材，检测造模是否成功。造模成功后，将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、盐酸贝那普利组各6只，进行药物灌胃，每日1次，治疗4周。于实验第1周末、第13周末、第17周末检测24 h尿蛋白定量（24 h-UTP），第17周各组大鼠麻醉后取材，腹主动脉取血后离心取上清检测血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清AngⅡ表达水平；苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色法观察肾组织病理改变；免疫组织化学（IHC）法观察AT1R、NOX4、TGF-β₁、COL1A1、COL3A1表达情况；实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）观察AT1R、NOX4、TGF-β mRNA表达水平；蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测AT1R、NOX4、TGF-β₁表达水平。结果 ①与正常组比较，模型组实验大鼠24 h-UTP显著增高（P<0.01）；模型组实验大鼠Cr、BUN含量水平显著升高（P<0.01），TP、ALB含量水平显著降低（P<0.01）；模型组实验大鼠血清AngⅡ含量显著升高（P<0.01）；模型组实验大鼠肾小球球囊间隙明显增宽，可见坏死肾小球，肾间质明显增宽伴有大量炎细胞浸润，大量肾小管管腔有褐色沉淀物阻塞，无规整肾小管，肾间质有大量胶原纤维沉积，肾脏血管周围、肾小囊壁层囊壁外、肾小球基底膜和肾小管基底膜胶原纤维明显增多；模型组实验大鼠AT1R、NOX4在肾小球、肾小管表达明显增强，TGF-β₁在肾小管表达明显增强，COL1A1、COL3A1在肾间质表达明显增强；模型组实验大鼠AT1R、TGF-β₁ mRNA表达显著增强（P<0.01），NOX4 mRNA表达显著减弱（P<0.01）；AT1R、NOX4、TGF-β₁蛋白表达显著增强（P<0.01）。②与模型组比较，加味真武汤干预后，24 h-UTP显著降低（P<0.01）；Cr、BUN含量水平显著降低（P<0.01），TP、ALB含量水平显著升高（P<0.01）；AngⅡ含量显著下降（P<0.01）；肾脏病理损害减轻；AT1R、NOX4、TGF-β₁、COL1A1、COL3A1在肾小球、肾小管、肾间质达减弱；AT1R、TGF-β₁ mRNA表达显著下降（P<0.01），NOX4 mRNA表达显著升高（P<0.01）；AT1R、NOX4、TGF-β₁蛋白表达显著减弱（P<0.01）；中药组表现出明显的量效趋势。结论 加味真武汤可能通过降低CRF大鼠血清及肾组织中AngⅡ、AT1R、NOX4、TGF-β₁表达，延缓肾间质纤维化进展，从而减轻肾脏病理损害，减少蛋白尿，保护肾功能，达到延缓CRF进展的目的，且中药组具有量效趋势。