恶性疟原虫红内期p41—3基因真核表达重组质粒的构建及序列分析

目的 构建恶性疟原虫海南（FCC1／HN）株p41-3基因真核表达重组质粒pcDNA3-p41-3，测定p41-3基因序列，并了解FCC1/HN株与其它分离株p41-3序列的差异。方法 根据p41-3基因已知序列设计合成3对引物，用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增p41-3基因；将p41-3基因定向克隆入真核表达载体pcDNA3，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞；用酶切，PCR扩增鉴定筛选到的重组质粒阳性克隆。以正确的重组质粒为模板，用双脱氧链末端终止法测定p41-3基因序列，应用软件辅助分析p41-3序列及进行同源性比较。结果 PCR扩增得到特异的FCC1/HN株p41-3基因；正确的pcDNA3-p41-3重组质粒被筛选和鉴定。测序表明，FCC1／HN株p41-3基因大小为2137bpo，编码375个氨基酸，恶性疟原虫FCC1/HN株与FCBR株p41-3基因核苷酸序列同性为98．98％，编码氨基酸序列同源性为99．73％。结论 从恶性疟原虫FCCl/HN株 基因组DNA中获取p41-3基因，成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-p41-3，并测定了FCC1／HN株p41-3基因的序列；FCC1／HN株与其它分离株p41-3基因有高度的同源性。