| 甲型H1N1流感病毒实时荧光RT-PCR检测法的建立及其在南京地区甲流防控早期的应用 |
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| 引用本文： | 张洪英,祈贤,杜雪飞,邓菲,史小超,叶艳华,石利民,丁洁,谢国祥.甲型H1N1流感病毒实时荧光RT-PCR检测法的建立及其在南京地区甲流防控早期的应用[J].现代预防医学,2011,38(1):131-134. |
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| 作者姓名： | 张洪英 祈贤 杜雪飞 邓菲 史小超 叶艳华 石利民 丁洁 谢国祥 |
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| 作者单位： | 1. 南京市疾病预防控制中心,南京,210003
2. 江苏省疾病预防控制中心 |
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| 基金项目： | 江苏省卫生厅预防医学科研课题资助 |
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| 摘 要： | 目的]建立并应用Taqman探针实时荧光RT-PCR法10μl检测体系对91例输入性甲型H1N1流感疑似病例及密切接触者进行病毒核酸特异、灵敏、快速的检测和感染排除。方法]采用美国CDC公布的探针和引物序列,比较了两种反应条件(无预扩增、有预扩增)和10μl、12.5μl及25μl3种反应体系的扩增效率;用预扩增10μl体系对季节性流感病毒核酸进行扩增;用预扩增程序及10μl体系对南京市91例输入性疑似病例及密切接触者的样本进行扩增,同时设置阳性对照和阴性对照。结果]应用美国CDC公布的探针和四对引物序列,3种反应体系对甲型H1N1流感病毒都可以获得有效扩增,而且应用3种反应体积的扩增CT值没有统计学差异(P﹥0.05)。增加预扩增的反应条件下敏感度有显著提高(P﹤0.05)。用10μl反应体系及增加预扩增程序对季节性流感病毒核酸进行扩增,第2对引物(猪流感通用引物)与第3对引物(甲型H1N1流感引物)未获得阳性扩增曲线,甲1、甲3亚型病毒核酸的扩增只有第一对引物(甲型通用引物)与第四对引物(阳性内参)获得阳性扩增曲线,对乙型流感病毒核酸的扩增只获得阳性内参的扩增曲线。对南京市91例输入性甲流疑似病例及密切接触者进行了有效检测和感染排除,并检测到第一例输入性甲型H1N1流感病毒感染病例,其四对引物扩增结果均为阳性。结论]该检测方法对甲型H1N1流感病毒有高度的特异性,对甲型流感病毒有通用性,10μl反应体系及增加预扩增程序可从疑似甲型H1N1流感患者鼻咽拭子中直接检测甲型H1N1流感病毒核酸,该方法可用于甲型H1N1流感病毒的日常检测并大大降低检测成本。
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| 关 键 词： | 荧光定量RT-PCR 甲型H1N1流感病毒 检测 |
ESTABLISHMENT AND APPLICATION OF REAL-TIME RT-PCR ASSAY FOR DETECTION OF INFLUENZA A H1N1 VIRUS IN PRIMARY PREVENTION AND CONTROL OF INFLUENZA A H1N1 IN NANJING |
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| Institution: | ZHANG Hong-ying,QI Xian,DU Xue-fei,et al.(Center for disease Control and Prevention of Nanjing municipality,Nanjing 210003,China) |
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