| GST-p60PLAD融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化 |
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| 引用本文： | 曹晓瑞,朱庆生,张大伟,李立文,杨泉生.GST-p60PLAD融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化[J].第四军医大学学报,2007,28(3):244-246. |
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| 作者姓名： | 曹晓瑞 朱庆生 张大伟 李立文 杨泉生 |
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| 作者单位： | 第四军医大学西京医院全军骨科研究所,陕西,西安,710033 |
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| 摘 要： | 目的:制备GST-p60PLAD融合蛋白. 方法:依据人p60PLAD氨基酸序列,根据大肠杆菌偏爱密码子进行反翻译,获得适合在大肠杆菌中表达的基因序列. 根据该基因序列设计五条引物,用重叠延伸PCR法获得编码人p60PLAD的基因,进而将其克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌BLR(DE3)polys. 经IPTG诱导表达后收集菌体,超声裂解,将上清液经GSTrapFF亲和层析柱纯化、经HiTrap脱盐柱脱盐,用SDS-PAGE进行分析. 结果:成功构建重组质粒pGEX-4T-2-p60PLAD,经DNA 测序证实插入序列与设计完全一致. 并在大肠杆菌中高表达出Mr约为34×103大小具有可溶性的目的蛋白,经亲和层析柱纯化后获得纯度很高的GST-p60PLAD融合蛋白. 结论:成功制备了高纯度的GST-p60PLAD融合蛋白,为进一步探讨p60PLAD蛋白的结构和生物学活性提供必要的物质基础.
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| 关 键 词： | 融合蛋白 可溶表达 纯化 |
| 文章编号： | 1000-2790(2007)03-0244-03 |
| 修稿时间： | 2006-09-01 |
Soluble expression and purification of fusion protein GST-p60PLAD in E.coli |
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| CAO Xiao-Rui,ZHU Qing-Sheng,ZHANG Da-Wei,LI Li-Wen,YANG Quan-Sheng.Soluble expression and purification of fusion protein GST-p60PLAD in E.coli[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2007,28(3):244-246. |
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| Authors: | CAO Xiao-Rui ZHU Qing-Sheng ZHANG Da-Wei LI Li-Wen YANG Quan-Sheng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | fusion protein sduble expression purification |
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