樟芝多糖通过ROS-NOX2-NLRP1信号减轻皮层神经细胞炎症损伤的作用研究

目的探讨樟芝多糖（ACP）通过抑制活性氧（ROS）-NADPH氧化酶2（NOX2）-NLRP1信号减轻皮层神经细胞（CNC）炎症损伤的作用和机制。方法在研究ACP抗炎症反应作用的实验中，将CNC分为对照组、脂多糖（LPS）组、ACP5mg/L组、ACP10mg/L组和ACP20mg/L组。对照组为常规培养的细胞，无LPS和ACP干预；LPS组用0.1mg/LLPS诱导细胞炎症反应；ACP各组分别使用终浓度为5、10、20mg/L的ACP进行预处理6h后，再用0.1mg/LLPS诱导细胞炎症反应。在研究ACP通过抑制ROS发挥作用的机制研究中，将CNC分为LPS组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）组和NAC+ACP组。LPS组用0.1mg/LLPS诱导细胞炎症反应；NAC组用10mMNAC预处理4h后，再用0.1mg/LLPS诱导细胞炎症反应；NAC+ACP组同时用10mMNAC和20mg/LACP预处理4h后，再用0.1mg/LLPS诱导细胞炎症反应。采用CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡水平，探针检测ROS的表达，Westernblot法检测NOX2、NLRP1蛋白表达水平，ELISA法检测培养基中IL-1β、IL-6及TNF-α表达水平。结果ACP预处理后，与LPS组比较，ACP5mg/L组、ACP10mg/L组和ACP20mg/L组细胞活力均明显上调，细胞凋亡率均下调，细胞中ROS的荧光光度值均降低，NOX2和NLRP1蛋白表达水平均降低，IL-1β、IL-6和TNF-α水平均降低（均P＜0.05）。ROS抑制剂NAC预处理后，与LPS组比较，NAC组和NAC+ACP组细胞凋亡率均下调，细胞中ROS的荧光光度值均降低，NOX2和NLRP1蛋白表达水平均降低，IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平均降低（均P＜0.05）；而NAC组和NAC+ACP组细胞凋亡率、细胞中ROS的荧光光度值、NOX2和NLRP1蛋白表达水平及L-1β、IL-6和TNF-α表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论ACP可以通过抑制ROS的表达来抑制NOX2-NLRP1的激活，从而减轻CNC的炎症反应。