SARS-CoV-2 PLpro在对IFN-α应答的肝细胞中独立诱导过度炎症相关坏死性死亡

目的：探讨新型冠状病毒（SARS-CoV-2）木瓜蛋白酶样蛋白酶（PLpro）在对干扰素α(IFN-α)应答的肝细胞中所介导的功能蛋白质组改变及其效应机制。方法：构建稳定表达PLpro的三株单克隆Huh7肝细胞（PLpro1～3）和对应的空载细胞（NC），分别以IFN-α刺激各株细胞建立处于IFN-α应答状态的肝细胞模型，采用数据非依赖质谱分析PLpro和NC组的定量蛋白质组，以生物信息学分析，预测PLpro对IFN-α应答性肝细胞的作用机制，并采用RT-qPCR、Western blot、细胞促炎因子水平分析、乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性分析和Annexin V-Alexa Fluor 647/PI凋亡检测等方法对上述机制进行生物学验证。结果：IFN-α可显著上调空载Huh7细胞株（NC细胞）中的ISG化蛋白（P<0.01），而相同条件下，PLpro细胞蛋白的ISG (IFN-stimulated gene)化修饰被显著下调（P<0.01），表明PLpro细胞株表达了具去ISG化活性PLpro，提示本研究成功建立了细胞模型。质谱分析鉴定和定量得到5 619个交集蛋白质和1...