乳兔心脏成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的：探讨并建立乳兔心脏成纤维细胞原代培养方法。方法：选取新出生1 d的新西兰白兔，采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化心脏组织，差速贴壁法分离和纯化心脏成纤维细胞；使用倒置显微镜观察细胞形态及生长情况，绘制细胞生长曲线；采用CCK-8法检测细胞活力；波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞纯度；Western blot法检测异丙肾上腺素刺激心脏成纤维细胞后Ⅰ型胶原蛋白（Col Ⅰ）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）水平。结果：差速贴壁90 min后在相差显微镜下可见部分成纤维细胞已贴壁生长；3 d后成纤维细胞数量较前增多，形态多样，多为不规则的多边形及扁平形；5 d时成纤维细胞数量显著增多（P<0.05），细胞形态趋于多样性，细胞间完全融合；细胞生长曲线类似“S”形。波形蛋白阳性率可达95%。CCK-8实验结果显示在4～5 d细胞活力最强（P<0.05）；给予第2代心脏成纤维细胞异丙肾上腺素刺激48 h后，Col I及α-SMA水平显著增加（P<0.05）。结论：本研究建立了乳兔心脏成纤维细胞原代培养方法。