摘 要: | 目的:探讨并建立乳兔心脏成纤维细胞原代培养方法。方法:选取新出生1 d的新西兰白兔,采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化心脏组织,差速贴壁法分离和纯化心脏成纤维细胞;使用倒置显微镜观察细胞形态及生长情况,绘制细胞生长曲线;采用CCK-8法检测细胞活力;波形蛋白免疫荧光细胞化学染色法鉴定细胞纯度;Western blot法检测异丙肾上腺素刺激心脏成纤维细胞后Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平。结果:差速贴壁90 min后在相差显微镜下可见部分成纤维细胞已贴壁生长;3 d后成纤维细胞数量较前增多,形态多样,多为不规则的多边形及扁平形;5 d时成纤维细胞数量显著增多(P<0.05),细胞形态趋于多样性,细胞间完全融合;细胞生长曲线类似“S”形。波形蛋白阳性率可达95%。CCK-8实验结果显示在4~5 d细胞活力最强(P<0.05);给予第2代心脏成纤维细胞异丙肾上腺素刺激48 h后,Col I及α-SMA水平显著增加(P<0.05)。结论:本研究建立了乳兔心脏成纤维细胞原代培养方法。
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