LPS与ATP共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的建立 |
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作者姓名: | 刘慧玲 吴传新 龙贤梨 李丽 李飞 郭晖 孙航 |
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作者单位: | 1. 重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所;2. 重庆医科大学附属第二医院肝胆外科 |
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基金项目: | 国家自然科学基金面上项目(81871608); |
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摘 要: | 目的:探索脂多糖(LPS)和三磷酸腺苷(ATP)共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的最佳条件。方法:采用流式细胞仪F4/80和CD-11b染色检测巨噬细胞纯度,Annexin V-PE/7-AAD双染色法筛选出LPS和ATP共同诱导细胞焦亡的最适浓度及时间。巨噬细胞随机分为control组、LPS组、ATP组和LPS+ATP组;Western blot检测GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1蛋白表达水平;ELISA检测培养上清中IL-1β和TNF-α表达水平;透射电镜(TEM)和扫描电镜(SEM)观察巨噬细胞焦亡形态。结果:巨噬细胞的纯度达到90%;500 ng/ml LPS 24 h+5 mmol/L ATP 4 h为诱导巨噬细胞焦亡的最佳组合方式;LPS+ATP组的GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1的蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05);培养上清中IL-1β和TNF-α表达量显著高于对照组(P&...
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关 键 词: | LPS ATP 细胞焦亡 原代腹腔巨噬细胞 脓毒症 |
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