血红素加氧酶1基因在小鼠肾足细胞中的表达及抗炎作用

目的 构建血红素加氧酶1基因(HO-1)真核双表达载体pCDNA3.1-ho-1:t2a:egfp,并在小鼠肾足细胞MPC5中过表达，研究HO-1在脂代谢紊乱模型下的抗炎作用。方法 取生长良好的人胚胎肾细胞HEK293t,提取总RNA反转录得到cDNA文库，扩增得到HO-1基因目的片段。将目的片段和载体进行双酶切，超滤管回收后T4-ligase连接，得到真核表达质粒命名为pCDNA3.1-ho-1:t2a:egfp。将载体进行菌液PCR、双酶切和测序鉴定后，转染小鼠肾足细胞MPC5,通过荧光显微镜和Western blot检测HO-1以及炎性因子表达情况。结果 以HEK293t为来源扩增得到的目的片段凝胶电泳位置正确；筛选得到的载体菌液PCR、双酶切凝胶电泳以及测序结果正确；转染细胞后，荧光显微镜和Western blot结果显示质粒转染成功，并且减少了炎性因子IL-18、IL-1β表达。结论 成功构建pCDNA3.1-ho-1:t2a:egfp双表达质粒，为糖尿病脂代谢紊乱细胞模型后续相关实验奠定基础。