| 用于PCR产物检测的液相杂交法的优化 |
| |
| 引用本文： | 郭晏海,任峰玲,崔大祥,闫小君. 用于PCR产物检测的液相杂交法的优化[J]. 中国实验诊断学, 2002, 6(5): 315-317 |
| |
| 作者姓名： | 郭晏海 任峰玲 崔大祥 闫小君 |
| |
| 作者单位： | 1. 第四军医大学全军基因诊断技术研究所,陕西,西安,710032
2. 西安交通大学医学院公共卫生系 |
| |
| 摘 要： | 目的 为了使液相交在检测更加灵敏、特异、快速。方法 通过改进杂交液的成分 ,选择最佳的探针浓度 ,使 5’端标记生物素的PCR扩增产物与 5’端标记地高辛的探针在PCR反应管中进行液相杂交 ,杂交条件为 :94℃ 10s冷却到 37℃ 10s即完成杂交。杂交后产物通过链霉素亲和素被固定在微孔表面 ,同时在含高浓度DMSO的杂交液中将非特异结合的探针解离 ,然后对被固定的特异杂交产物进行ELISA检测。结果 液相杂交的条件优化 :杂交液中DMSO浓度为 30 0ml/L ,探针浓度为 0 5 μmol/L ,杂交温度为 37℃。对 6 0bp～ 6 0 0bp的PCR产物的杂交特异性无明显差异 ,可以检测到 1× 10 4copy的PCR产物 ,对 10 0例乙型肝炎患者的血清进行检测 ,HBsAg( )、HBeAg( )、抗HBc( )的血清检出HBVDNA阳性为 10 0 % (30 / 30 ) ;HBsAg( )、抗HBe( )、抗HBc( )的血清检出HBVDNA阳性为 10 0 % (30 /30 ) ;HBsAg( )、抗HBe( )、抗HBc( )的血清检出HBVDNA阳性为 78 6 % (2 2 / 2 8) ;HBsAg( )、抗HBc( )的血清检出HBVDNA阳性为 6 6 7% (16 / 2 4 ) ,其余为阴性。结论 该液相杂交法操作简单、快速、灵敏、特异 ,适合临床实验室使用
|
| 关 键 词： | PCR 液相杂交 优化 |
| 文章编号： | 1007-4287(2002)06-0315-03 |
| 修稿时间： | 2001-10-08 |
Optimization of liquid-phase hybridization assay used for detecting the products of PCR |
| |
| GUO Yan Hai,REN Feng ling,CUI Da xing,et al.. Optimization of liquid-phase hybridization assay used for detecting the products of PCR[J]. Chinese Journal of Laboratory Diagnosis, 2002, 6(5): 315-317 |
| |
| Authors: | GUO Yan Hai REN Feng ling CUI Da xing et al. |
| |
| Affiliation: | GUO Yan Hai,REN Feng ling,CUI Da xing,et al.) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | PCR liquid phase hybridization assay optimization |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
