| 5-HT_(1A)受体蛋白在PC12细胞膜转运的动态变化 |
| |
| 引用本文： | 金艳燕,吕琼,闫竹青,高尔静,赵春礼,张进禄,徐志卿.5-HT_(1A)受体蛋白在PC12细胞膜转运的动态变化[J].基础医学与临床,2010,30(5):487-491. |
| |
| 作者姓名： | 金艳燕 吕琼 闫竹青 高尔静 赵春礼 张进禄 徐志卿 |
| |
| 作者单位： | 首都医科大学,神经生物学系,北京神经科学研究所北京市神经再生修复研究重点实验窒,北京,100069 |
| |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划973(2007CB512307);;北京市自然科学基金重点项目(09G0013);;人事部留学人员科技活动择优资助项目 |
| |
| 摘 要： | 目的在神经元样PC12活细胞上进行实时、可视和定量研究5-羟色胺1A受体的时空分布、膜转运和信号传导机制。方法运用RT-PCR方法获得小鼠5-HT1A基因,并插入到pEGFP-N1真核表达载体中。采用阳离子脂质体方法将质粒转染至PC12细胞和HEK293细胞中,通过G418筛选出稳定表达5-HT1A-EGFP的PC12细胞系。运用激光共聚焦成像系统观察活细胞中5-HT1A-EGFP的表达情况,利用光漂白荧光恢复(FRAP)技术在PC12细胞膜局部漂白后观察5-HT1A-EGFP荧光蛋白在细胞膜上转运的情况。结果克隆所获得的小鼠5-HT1A基因是准确的。5-HT1A-EGFP蛋白清晰的分布于PC12和HKE293细胞膜上。通过FRAP技术观察到漂白区域的细胞膜在100s内有部分恢复,说明受体在细胞膜上发生转运。结论建立了稳定表达5-HT1A-EGFP融合蛋白的PC12细胞系,并利用活细胞成像和FRAP技术观察分析并证实了5-HT1A受体在PC12细胞的膜表面的表达和转运的动态变化。
|
| 关 键 词： | 5-羟色胺1A受体（5-HT1A） G蛋白偶联受体（GPCRs） 绿色荧光蛋白（GFP） PC12细胞 光漂白荧光恢复技术（FRAP） |
| 收稿时间： | 2010-2-24 |
| 修稿时间： | 2010-3-10 |
Visualization of serotonin 1A receptor trafficking in neuron-like PC12 cells |
| |
| JIN Yan-yan,LU Qiong,YAN Zhu-qing,GAO Er-jing,ZHAO Chun-li,ZHANG Jin-lu,XU Zhi-qing.Visualization of serotonin 1A receptor trafficking in neuron-like PC12 cells[J].Basic Medical Sciences and Clinics,2010,30(5):487-491. |
| |
| Authors: | JIN Yan-yan LU Qiong YAN Zhu-qing GAO Er-jing ZHAO Chun-li ZHANG Jin-lu XU Zhi-qing |
| |
| Institution: | Dept.of Neurobiology and Beijing Institute for Neuroscience;Beijing Center of Neural Regeneration & Repair;Capital Medical University;Beijing 100069;China |
| |
| Abstract: | Objective To explore the mechanisms of trafficking and signaling of serotonin 1A receptor(5-HT1A)and its spatiotemporal distribution in living cells.Methods The mouse 5-HT1A gene amplified by RT-PCR was recombined into pEGFP-N1 vector and the EGFP coding sequence was located in-frame at the C-terminal end of the 5-HT1A receptor.The 5-HT1A-EGFP was transfected into neuron-like PC12 cells as well as HEK293.The transfected cells were visualized using confocal microscopy,the mobility of 5-HT1A-EGFP was monitore... |
| |
| Keywords: | serotonin 1 A receptor(5-HT_(1A)) G protein-coupled receptors(GPCRs) green fluorescent protein(GFP) PC 12 cell fluorescence recovery after photobleaching(FRAP) |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《基础医学与临床》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《基础医学与临床》下载免费的PDF全文 |
