人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制。方法 人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本，取第2 ～ 5代细胞进行实验。采用MTT法测定体外培养的人黑素细胞增殖情况，分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性，氢氧化钠裂解法测定黑素含量，免疫蛋白印记法测定黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形相关转录因子（MITF）的表达及cAMP应答元件结合蛋白（CREB）的磷酸化。结果 体外培养的人黑素细胞分别加入25、50、100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用72 h后，黑素细胞存活率3组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05），黑素含量呈浓度依赖性增加（与溶剂对照组相比的相对黑素含量分别为112.4% ± 5.7%、155.7% ± 6.3%、217.2% ± 11.7%），酪氨酸酶活性增加（相对酪氨酸酶活性分别为117.9% ± 5.7%、158.2% ± 9.6%、182.6% ± 10.0%）。100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h，黑素细胞酪氨酸酶（225.4 %± 12.8%）、MITF（313.5% ± 16.7%）蛋白表达明显升高（与溶剂对照组相比，P值均 < 0.01），CREB磷酸化明显增加（322.5% ± 21.1%）（与溶剂对照组相比，P < 0.01）。100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用黑素细胞8 h，MITF蛋白表达无明显变化；作用24 h后，MITF表达明显增加，与0时间点相比，P < 0.01。10 μmol/L的蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89预处理细胞，可明显抑制100 μmol/L人参皂苷Rb1引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加，与100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h比较，P值均 < 0.01，进而抑制人参皂苷Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加。 结论 人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制。

Effects of ginsenoside Rb1 on melanogenesis in human epidermal melanocytes