pcDNA3-bFGF真核表达载体的构建和鉴定

目的 构建pcDNA3碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)真核表达质粒，为进一步开展bFGF基因治疗中枢神经疾病奠定基础。方法 建立SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增脑细胞中bFGF基因；载体和RT-PCR产物经BamHl和EcoRI酶切，纯化，T4 DNA连接酶连接，转化大肠杆菌，抗生素筛选重组质粒。结果 RT-PCR产物为649bp特异片段，pcDNA3-bFGF重组体茵落PCR产物为649bp特异片段，测序分析为bFGF基因片段。结论 经RT-PCR．反应得到特异的bFGF基因片段，并成功构建了大鼠bFGF真核表达载体。