肝癌靶向性T细胞活化融合基因scFv-CD3ζ的构建与表达 |
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引用本文: | 李锴男,刘彦仿,孙妍琳,付勇,赵君,高娟,杨守京.肝癌靶向性T细胞活化融合基因scFv-CD3ζ的构建与表达[J].肿瘤防治杂志,2004,11(4):337-340. |
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作者姓名: | 李锴男 刘彦仿 孙妍琳 付勇 赵君 高娟 杨守京 |
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作者单位: | [1]第四军医大学病理学教研室,陕西西安710032 [2]山东大学医学院病理学教研室,山东济南250012 |
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摘 要: | 目的:构建抗肝癌单链抗体融合CD3(真核表达载体。方法:应用PCR法将二硫键稳定的人源化的单链抗体scFv的基因克隆入真核细胞表达载体pcDNA3,在5′端及3′端分别引入相应酶切位点;用RT-PCR法从正常外周血人T细胞扩增出CD3ζ的胞内区、跨膜区基因,然后将其克隆于scFv的下游,并在5′端及3′端引入相应的酶切位点。以脂质体转染法将pcDNA3-scFv-CD3ζ转入T细胞,采用免疫细胞化学的方法,利用抗CD3(的单克隆抗体检测转染前后T细胞中CD3ζ的表达。结果:二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体ScFv的cDNA片段为735bp,与已知的序列相符;CD3ζ的胞内区、跨膜区的cDNA片段为294bp,与GeneBank公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实。转染前后T细胞中CD3ζ染色强度显著增强。结论:完成了二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv及CD3ζ的胞内区、跨膜区融合基因真核表达载体pcDNA3-scFv-CD3ζ的构建,制备了肝癌靶向性T细胞。
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关 键 词: | 肝肿瘤/免疫学 T淋巴细胞 基因表达 抗原,肿瘤/遗传学 克隆,分子 遗传载体 |
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