肝癌靶向性T细胞活化融合基因scFv-CD3ζ的构建与表达

目的：构建抗肝癌单链抗体融合CD3(真核表达载体。方法：应用PCR法将二硫键稳定的人源化的单链抗体scFv的基因克隆入真核细胞表达载体pcDNA3，在5′端及3′端分别引入相应酶切位点；用RT-PCR法从正常外周血人T细胞扩增出CD3ζ的胞内区、跨膜区基因，然后将其克隆于scFv的下游，并在5′端及3′端引入相应的酶切位点。以脂质体转染法将pcDNA3-scFv-CD3ζ转入T细胞，采用免疫细胞化学的方法，利用抗CD3(的单克隆抗体检测转染前后T细胞中CD3ζ的表达。结果：二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体ScFv的cDNA片段为735bp，与已知的序列相符；CD3ζ的胞内区、跨膜区的cDNA片段为294bp，与GeneBank公布的序列一致。重组的表达载体经酶切琼脂糖电泳及测序加以证实。转染前后T细胞中CD3ζ染色强度显著增强。结论：完成了二硫键稳定的人源化抗肝癌的单链抗体scFv及CD3ζ的胞内区、跨膜区融合基因真核表达载体pcDNA3-scFv-CD3ζ的构建，制备了肝癌靶向性T细胞。