| Cystatin M,Cathepsin B双基因共表达载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 张和军,王海燕,葛爱敏,林丛,高美钦,郑伟,万榕.Cystatin M,Cathepsin B双基因共表达载体的构建及鉴定[J].第四军医大学学报,2009,30(10). |
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| 作者姓名： | 张和军 王海燕 葛爱敏 林丛 高美钦 郑伟 万榕 |
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| 作者单位： | 张和军,王海燕,高美钦,郑伟,万榕,ZHANG He-Jun,WANG Hai-Yan,GAO Mei-Qin,ZHENG Wei,WAN Rong(福建医科大学病理学系肿瘤研究室,福建,福州,350004);葛爱敏,GE Ai-Min(菏泽市立医院病理科,山东,菏泽,274600);林丛,LIN Cong(福建医科大学附属第一医院放疗科,福建,福州,350004)
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| 基金项目： | 福建省省属高校基金，福建省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂M(Cystatin M,CST6),反义组织蛋白酶B(CB)单/双基因共表达载体.方法:从人胎盘组织中用TRIzol试剂提取总RNA,巢式PCR扩增人Cystatin M基因全长cDNA片段,RT-PCR扩增CB基因cDNA片段.将扩增的Cystatin M插入到真核表达载体pBudCE4.1的Hind Ⅲ位点上,将CB插入到带有及不带Cystatin M基因真核表达载体pBudCE4.1的Xho I位点上.构建pBudCE4.1/CST6,pBudCE4.1/CB单基因表达载体及pBudCE4.1/CST6-CB双基因共表达载体.利用PCR、酶切分析和序列测定方法进一步验证所构建质粒的准确性.结果:人CST6,CB的RT-PCR扩增产物片段大小分别为447,257bp.对pBudCE4.1/CST6,pBudCE4.1/CB,pBudCE4.1/CST6-CB进行测序分析证实CST6,CB序列均正确,酶切鉴定及PCR结果显示,CST6,CB的大小分别为447,257 bp且已克隆至pBudCE4.1中.结论:成功构建了pBudCE4.1/CST6,pBudCE4.1/CB,pBudCE4.1/CST6-CB表达载体,为深入探讨2种基因在肿瘤侵袭中的生物学作用机制奠定了基础.
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| 关 键 词： | 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 组织蛋白酶B 基因表达调控 基因 DNA 重组 遗传载体 |
Construction of vector of Cystatin M,Cathepsin B gene coexpression and sequence analysis |
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| ZHANG He-Jun,WANG Hai-Yan,GE Ai-Min,LIN Cong,GAO Mei-Qin,ZHENG Wei,WAN Rong.Construction of vector of Cystatin M,Cathepsin B gene coexpression and sequence analysis[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2009,30(10). |
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| Authors: | ZHANG He-Jun WANG Hai-Yan GE Ai-Min LIN Cong GAO Mei-Qin ZHENG Wei WAN Rong |
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| Institution: | ZHANG He-Jun1,WANG Hai-Yan1,GE Ai-Min2,LIN Cong3,GAO Mei-Qin1,ZHENG Wei1,WAN Rong11Department of Pathology,Institute of Oncology,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China,2Department of Pathology,Heze Municipal Hospital,Heze 274600,3Deparment of Radiotherapy,First Affiliated Hospital,Fuzhou 350005 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | cysteine proteinese inhibitors gene expression regulation cathepsin B genes DNA recombinant genetic vectors |
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