5-氮杂脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2中抑癌基因FHIT表达的影响 |
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引用本文: | 李洪利,张伟栋,李文通,尹崇高. 5-氮杂脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2中抑癌基因FHIT表达的影响[J]. 癌症, 2009, 28(9): 967-971 |
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作者姓名: | 李洪利 张伟栋 李文通 尹崇高 |
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作者单位: | 山东省潍坊医学院医学研究实验中心,山东潍坊,261042;潍坊医学院病理学教研室,山东潍坊,261042;潍坊医学院护理学院,山东潍坊,261042 |
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摘 要: | 背景与目的:肝癌细胞中由于FHIT基因过度甲基化而导致其表达降低。本实验应用甲基化酶抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-2’deoxycytidine,5-Aza—dc)作用肝癌细胞株HepG2。观察用药后肝癌细胞中FHITmRNA和蛋白表达的变化,并观察5-Aza-dC对细胞增殖的影响。方法:以5-Aza—dC作用HepG2细胞.采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation—specific polymerase chain reaction,MSP)检测HepG2细胞中FHIT甲基化变化;采用RT-PCR检测FHITmRNA的表达:采用细胞免疫组织化学染色和Western blot方法检测FHIT蛋白表达,MTT法检测HepG2细胞增殖情况。结果:5-Aza—dC处理前,HepG2细胞FHIT基因呈甲基化状态,mRNA及蛋白表达缺失;经5-Aza—dC作用后,MSP显示HepG2细胞FHIT基因甲基化逆转:经1.0μmol/L、2.0μmol/L及4.0μmol/L的5-Aza—dC作用48h后,FHIT基因mRNA扩增出产物的吸光度值分别为0.80±0.32、1.41±0.54和1.51±0.61。Western blot检测产物积分灰度值分别为0.33±0.20、1.00±0.26和1.12±0.38:当药物浓度达到1.0μmol/L时出现了对HepG2细胞增殖的抑制作用。结论:5-Aza—dC能明显逆转HepG2细胞的FHIT基因异常甲基化,激活因高甲基化所致基因沉默的再转录,诱导该基因的表达;同时抑制细胞增殖。
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关 键 词: | 5-氮杂脱氧胞苷 肝肿瘤 FHIT基因 甲基化 甲基化特异性聚合酶链式反应 |
Effect of 5-Aza-dC on FHIT gene expression in hepatocellular carcinoma cell line HepG2 |
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Affiliation: | Hong-Li Li, Wei-Dong Zhang, Wen-Tong Li, Chong-Gao Yin (1. Medicine Research Experiment Center of Science Research, Weifang Medical College, Weifang, Shandong, 261042, P. R. China; 2. Department of Pathology, Weifang Medical College, Weifang, Shandong, 261042, P. R. China ;3. Department of Nursing, Weifang Medical College, Weifang, Shandong, 261042, P. R. China) |
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Abstract: | |
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Keywords: | 5-Aza-2'-deoxycytidine liver neoplasm FHIT gene methylation methylation-specific PCR |
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