促红素N-糖链的超高压液相色谱分析方法验证

目的:应用超高压液相色谱方法对促红素N-糖链分析并进行方法学验证，为相应质控方法的建立和验证提供参考。方法:用N-糖苷酶将促红素N-糖链酶切下后，进行2-AB衍生化标记，采用磁珠法纯化后进行液相分析，以pH 4.4的100 mmol·L^-1甲酸铵溶液为流动相A液，70%乙腈为流动相B液，梯度洗脱70.0 min,荧光检测器检测，激发光波长260 nm、发射光波长430 nm。对该方法进行了相应的方法学验证。结果:考察了方法进样和制备重复性，峰簇1～5的峰面积百分比的RSD不高于4.08%,保留时间的RSD均不高于2.89%。方法中间精密度考察结果显示，峰簇1～5的峰面积百分比的RSD不高于11.85%,保留时间的RSD均不高于8.05%。方法准确度考察中，峰簇2,3,4相对峰面积回收率分别为98.28%～113.01%,98.68%～102.96%,98.51%～100.75%。在蛋白含量为2.5～7.5 mg·mL^-1(即促红素蛋白量50～150μg)时，峰簇1～5峰面积线性回归的决定系数均>0.99。设定方法定量限为蛋白量50μg,...