| 类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1395蛋白表达及其抗体制备与鉴定 |
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| 引用本文： | 胡艺,胡志强,马腾飞,韩丹,李倩,方瑶,毛旭虎.类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1395蛋白表达及其抗体制备与鉴定[J].第三军医大学学报,2017,39(10). |
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| 作者姓名： | 胡艺 胡志强 马腾飞 韩丹 李倩 方瑶 毛旭虎 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院医学检验系临床微生物及免疫学教研室,重庆,400038 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(30973402)Supported by the Gene ral Program of National Natural Science Foundation of China |
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| 摘 要： | 目的 重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1395,利用其抗体检测该蛋白在细菌中的分布.方法 以pET-22b为表达系统,采用DNA重组技术在大肠杆菌中表达BPSS1395蛋白;用纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔,Western blot及ELISA法鉴定其免疫学性质;以制备的抗血清Western blot分析该蛋白的亚细胞定位.结果 从类鼻疽杆菌BPC006株基因组DNA中PCR得到了BPSS1395目的基因,并成功构建pET-22b-BPSS1395重组质粒,转化到E.coli宿主菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达、纯化得到了相对分子质量为32×103的高纯度BPSS1395蛋白,制备的兔抗血清ELISA效价均高达1:1280000,并能与目的蛋白发生特异性抗原抗体反应.亚细胞分离后BPSS1395在类鼻疽杆菌中主要定位于细胞质.结论 重组表达了具有生物活性的BPSS1395蛋白,制备了其特异性多克隆抗体,证明了该蛋白定位于细胞质.
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| 关 键 词： | 类鼻疽杆菌 Ⅲ型分泌系统蛋白 抗体制备与鉴定 |
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