| NOD小鼠CD8α+抗原基因克隆载体的构建及其相关蛋白在树突状细胞中的表达 |
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| 作者姓名： | 乔伟 冯乐平 孙情 熊毅 黎玉凤 |
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| 作者单位： | 桂林医学院药学院药学实验教学中心,广西桂林,541004;桂林医学院生物技术学院生物技术教研室,广西桂林,541004 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助课题(31060161,30860116);广西壮族自治区科技厅科研基金资助课题(桂科自0728230);广西壮族自治区教育厅科研基金资助课题(桂教科研[2010]10号,201010LX325,201010LX326) |
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| 摘 要： | 目的：构建NOD小鼠CD8α+抗原基因重组慢病毒载体，探讨其在树突状细胞（DCs）中的表达，阐明1型糖尿病（T1DM）的发病机理。方法：设计CD8α+基因特异性引物，从NOD小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA，采用RT-PCR法扩增CD8α+基因，与质粒载体pCDF1-MCS2-EF1-COPGFP进行连接重组，经过转化、筛选、鉴定和序列测定后，应用Western blotting法检测CD8α+基因的表达。应用Nanofectin脂质体转染试剂将含有目的基因的质粒转染HEK293细胞，进行重组慢病毒载体包装，将包装后的重组慢病毒颗粒感染DCs，采用Western blotting法检测CD8α+蛋白的表达。结果：成功构建了NOD小鼠CD8α+抗原基因的重组质粒载体，重组表达载体经转染HEK293细胞获得了重组病毒的原液，重组病毒扩增后感染DCs，免疫荧光下可见DCs内含有绿色荧光蛋白(GFP)表达。结论：NOD小鼠CD8α+抗原基因重组病毒载体构建成功，且有相关蛋白表达。
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| 关 键 词： | 1型糖尿病 CD8α+抗原基因 慢病毒载体 基因克隆 树突状细胞 |
| 收稿时间： | 2012-07-24 |
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