低氧环境下共培养的骨膜细胞和髓核细胞骨向分化能力的研究

目的]探讨低氧环境对体外共培养的骨膜细胞、髓核细胞骨向分化能力的影响。方法]采用组织块法分离兔骨膜细胞,胰酶、胶原酶消化法获取髓核细胞,传至3代进行共培养实验,实验分为2组:正常氧组(20%O2)、低氧组(5%O2),共培养后用CCK-8检测细胞增殖情况,用AKP试剂盒、BCA试剂盒检测碱性磷酸酶活性,RT-PCR检测骨钙素、Ⅰ型胶原、RUNX2以及HIF-1a mRNA的表达,免疫组化试剂盒检测Ι型胶原的表达,茜素红染色检测钙盐沉积或钙结节。结果]骨膜细胞和髓核细胞在体外成功分离和培养,共培养后保持了较高的增殖率,经过成骨诱导培养后成功诱导为成骨细胞,细胞增殖曲线为"S"型,两组在1、3、5、7、9 d的光吸收值(OD)比较差异有统计学意义(P0.05);低氧组的骨钙素、Ⅰ型胶原、RUNX2以及HIF-1a mRNA表达水平高于常氧组(P0.05),碱性磷酸酶(ALP)活性高于常氧组(P0.05),细胞成骨染色(茜素红染色、免疫组化)结果显示低氧组较常氧组表达增多。结论]低氧条件下体外共培养的骨膜细胞和髓核细胞经成骨诱导后向成骨细胞分化的能力更强。

Osteogenic capability of co-cultured rabbit periosteal cells and nucleus puplousus cells in hypoxic conditions