| 细胞内p53蛋白LC-MS/MS定量方法及其应用 |
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| 引用本文： | 李盈淳,汤志远,吴梦秋,王广基,郝海平. 细胞内p53蛋白LC-MS/MS定量方法及其应用[J]. 中国药科大学学报, 2012, 43(6): 519-525 |
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| 作者姓名： | 李盈淳 汤志远 吴梦秋 王广基 郝海平 |
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| 作者单位： | 中国药科大学药物代谢动力学重点实验室;中国药科大学药物代谢动力学重点实验室;中国药科大学药物代谢动力学重点实验室;中国药科大学药物代谢动力学重点实验室;中国药科大学药物代谢动力学重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家“重大新药创新”科技重大专项资助项目（No.2009ZX09304-001） |
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| 摘 要： | 建立细胞样品中p53蛋白的LC-MS/MS定量方法，应用该定量方法测定放线菌素D作用下细胞中p53表达量的变化。采用免疫沉淀法提取细胞样品中的p53蛋白，对提取后的样品进行酶解，基于肽图分析选择特异性肽段VEYLDDR（m/z 455.22+-681.21+）作为定量肽段，设计合成肽段VEYIEDR（m/z 462.12+-695.21+）作为内标肽段，建立该肽段的LC-MS/MS定量方法，通过该肽段表征p53蛋白的量；应用该质谱定量方法对放线菌素D给药后的HCT116细胞中的p53蛋白的表达量进行测定。p53蛋白质谱定量方法学考证表明，方法的线性良好（R2=0.999 3），范围2.2~112.3 pmol/mL；专属性好，基质中无干扰成分，批内批间精密度及稳定性均符合生物样品的测定要求；放线菌素D给药后细胞中p53蛋白的表达量呈给药浓度与给药时间依赖性增加。建立的细胞样品中p53蛋白的LC-MS/MS定量方法可以准确的测定细胞内的p53蛋白表达量。
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| 关 键 词： | LC-MS/MS；放线菌素D；定量 |
Quantification of p53 protein using liquid chromatography tandem mass spectrometry in cells and its application |
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| LI Ying-chun,TANG Zhi-yuan,WU Meng-qiu,WANG Guang-ji and HAO Hai-ping. Quantification of p53 protein using liquid chromatography tandem mass spectrometry in cells and its application[J]. Journal of China Pharmaceutical University, 2012, 43(6): 519-525 |
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| Authors: | LI Ying-chun TANG Zhi-yuan WU Meng-qiu WANG Guang-ji HAO Hai-ping |
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| Keywords: | p53 LC-MS/MS actinomycin D quantification |
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