| 人DR5胞外区域克隆及在大肠埃希菌中表达 |
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| 引用本文： | 邢万金, 包晓红. 人DR5胞外区域克隆及在大肠埃希菌中表达[J]. 中国公共卫生, 2008, 24(6): 762-764. DOI: 10.11847/zgggws2008-24-06-70 |
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| 作者姓名： | 邢万金 包晓红 |
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| 作者单位： | 1.内蒙古大学生命科学学院生物系, 呼和浩特010021 |
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| 摘 要： | 目的 克隆人死亡受体5(DR5)cDNA的胞外区域(eDR5),构建原核重组表达载体pGEX-eDR5,使eDR5在大肠埃希菌中表达。方法 采用RT-PCR(反转录PCR)方法从人肝癌细胞HepG2中获得eDR5,然后克隆到pMD19-T载体上进行测序,得到正确的基因片段。经双酶切将目的基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1上,测序正确后,转入大肠埃希菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达GST-eDR5融合蛋白,最后用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测目的蛋白的表达量。结果 重组克隆载体pMD-eDR5经测序鉴定序列正确。构建的融合表达载体pGEX-eDR5在大肠埃希菌中表达,可溶性目的蛋白占细菌总蛋白约19%。结论 成功克隆了人DR5 cDNA的胞外区域,并在大肠埃希菌中表达。为下一步分离纯化人DR5重组蛋白,制作多克隆抗体提供基础依据。
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| 关 键 词： | 死亡受体5 基因克隆 原核表达 |
| 收稿时间： | 2007-09-23 |
Cloning and expression of extracellular fragment of human DR5 in E. coli |
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| XING Wan-jin, BAO Xiao-hong. Cloning and expression of extracellular fragment of human DR5 in E.coli[J]. Chinese Journal of Public Health, 2008, 24(6): 762-764. DOI: 10.11847/zgggws2008-24-06-70 |
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| Authors: | XING Wan-jin BAO Xiao-hong |
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| Affiliation: | 1.Department of Biology, College of Life Science, Inner Mongolia University Hohhot 010021, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | death receptor 5(DR5) gene cloning prokaryotic expression |
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