| 白细胞介素4反义基因腺相关病毒载体质粒的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 曹勇,熊维宁,徐永健,张珍祥,高宝安,陆俊羽.白细胞介素4反义基因腺相关病毒载体质粒的构建及鉴定[J].华中科技大学学报(医学版),2006,35(2):146-149. |
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| 作者姓名： | 曹勇 熊维宁 徐永健 张珍祥 高宝安 陆俊羽 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科,武汉,430030 |
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| 摘 要： | 目的构建携带大鼠反义白细胞介素4（IL-4）基因并含有腺相关病毒（AAV）末端反向重复序列（ITR）结构的重组质粒载体pasIL-4。方法利用基因重组技术将大鼠IL-4eDNA反向克隆到已酶切去除绿色荧光蛋白（GFP）基因的真核表达载体phMGFP中，构建重组中间质粒载体。通过PCR技术扩增获取重组中间质粒载体上的目的片段CMVρ-asIL-4-SV40ε，将此目的片段定向插入已酶切处理的psub201中，构建出重组质粒pasIL-4。进一步通过阳离子脂质体介导，将pasIL-44转染哮喘大鼠CD4^＋T细胞，RT—PCR法和ELISA法分别检测细胞中IL-4mRNA和细胞培养上清液IL-4蛋白的变化。结果pasIL-4经限制性酶切及部分序列测序分析证实II，4反向插入正确。pasIL-4重组质粒转染的CD4^＋T细胞IL-4mRNA水平和细胞培养上清液中IL-4水平较未转染组明显下降。结论pasIL-4重组质粒载体构建成功，为今后利用其进行哮喘基因治疗的研究奠定基础。
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| 关 键 词： | 哮喘 白细胞介素4 腺相关病毒 质粒 |
| 修稿时间： | 2005年4月14日 |
Construction and Identification of Adeno-associated Virus-based Plasmid Carrying Antisense IL-4 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | asthma interleukin-4 adeno-associated virus plasmid |
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