人端粒酶反转录酶启动子的克隆与肿瘤靶向治疗的研究 |
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引用本文: | 李帆,谭晓华,彭晓君,蔡红兵,胡大荣.人端粒酶反转录酶启动子的克隆与肿瘤靶向治疗的研究[J].第一军医大学学报,2005,25(2):207-211. |
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作者姓名: | 李帆 谭晓华 彭晓君 蔡红兵 胡大荣 |
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作者单位: | [1]北京军区总医院肝病治疗中心,北京100700 [2]北京军区总医院肿瘤诊疗中心,北京100700 [3]南方医科大学中医系,广东广州510515 |
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摘 要: | 目的 克隆hTERT启动子,并观察hTERT启动子调控下tk/GCV系统对人肺癌细胞系A549的特异性杀伤效果。方法 设计特异性引物,以HepG2基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hTERT启动子;分别构建hTERT启动子和hCMV启动子调控的LacZ、tk基因真核表达载体:将上述质粒用脂质体转染A549细胞和人胚肺成纤维细胞系MRC5后。通过RT—PCR和β-Gal染色观察hTERT启动子工作情况;用MTT法检测不同浓度的GCV对A549和MRC5细胞的细胞毒作用。结果 成功克隆hTERT上游-280bp~ 40bp的核心启动子。RT-PCR和B-Gal染色显示hTERT启动子能有效地调控其下游tk基因、LacZ基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中特异性转录和表达.hTERT启动子调控的tk/GCV系统对端粒酶阳性的肿瘤细胞系A549有明显的特异性杀伤效应。结论 hTERT启动子可特异性地调控目的基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中表达而不影响正常的细胞,表明端粒酶启动子调控自杀基因的表达是一种很有希望的肿瘤靶向基因治疗策略。
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关 键 词: | 肿瘤 hTERT启动子 GCV 调控 表达 人端粒酶反转录酶 特异性杀伤 克隆 目的基因 LacZ基因 |
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