| 华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 陈守义,余新炳,徐劲,虢国泰,蒋忠军,吴德,胡旭初,李军涛. 华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库的构建及鉴定[J]. 热带医学杂志, 2003, 3(1): 22-24,8 |
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| 作者姓名： | 陈守义 余新炳 徐劲 虢国泰 蒋忠军 吴德 胡旭初 李军涛 |
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| 作者单位： | 中山大学中山医学院病原生物学部,广州,510080;广州军区联勤部医学研究所 |
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| 基金项目： | 广东省科学技术团队项目及广东省自然基金资助(No.012349) |
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| 摘 要： | 目的 构建华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。方法提取华支睾吸虫囊蚴总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒并按其操作方法进行,进行反转录合成双链cDNA。PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后,进行SfiI酶切;用ChromaSpin 400柱将酶切产物进行分级分离,经1.1％琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收0.4～4kb的组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度;随机挑取9个噬菌斑,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果 未扩增文库滴度达7.0×107pfu/ml,扩增文库滴度达2.5×108pfu/ml;用载体两端的引物进行PCR鉴定,结果显示:扩增文库中,含1kb以上的占30％左右,1kb～500bp占69％。结论已成功地获得一高质量的华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库。
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| 关 键 词： | 华支睾吸虫 cDNA表达文库 构建 |
| 文章编号： | 1672-3619(2003)01-0022-03 |
Construction and Identification of a cDNA Expression Library from Clonorchis sinensis Metacercaria |
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| CHEN Shou-yi,YU Xin-bing,XU Jin.GUO Guo-tai,JIANG Zhong-jun.WU De,HU Xu-chu,LI Jun-tao. Construction and Identification of a cDNA Expression Library from Clonorchis sinensis Metacercaria[J]. Journal Of Tropical Medicine, 2003, 3(1): 22-24,8 |
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| Authors: | CHEN Shou-yi YU Xin-bing XU Jin.GUO Guo-tai JIANG Zhong-jun.WU De HU Xu-chu LI Jun-tao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Clonorchis sinensis cDNA expression library constrution |
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