夏枯草水提物活性成分促进人甲状腺乳头状癌细胞自噬性死亡

目的?探讨夏枯草（Prunella vulgaris L.）水提物中活性成分对人甲状腺乳头状癌细胞株K1自噬性死亡的影响。方法?通过高效液相色谱串联质谱分析夏枯草水提物中的活性成分，采用CCK-8观察海藻糖、山柰酚、原儿茶酸、丹酚酸B、金丝桃苷、虫草素、木犀草素及水飞蓟宾8种活性成分对K1细胞及人正常甲状腺滤泡上皮细胞HUM-CELL-0097的作用。使用平板克隆实验观察IC50组（120 mmol/L海藻糖）和IC50组（110 μmol/L山柰酚）对K1细胞增殖能力的影响。海藻糖分为对照组、0.5 IC50（60 mmol/L）和IC50组（120 mmol/L），山柰酚分为对照组、0.5 IC50（55 μmol/L）和IC50组（110 μmol/L），分别处理细胞24 h，Western Blot测定K1细胞内自噬相关蛋白（Beclin-1、LC3 Ⅱ、P62）的表达量，透射电镜观察自噬小体形成情况，以上试验均重复3次。结果?夏枯草水提物中具有潜在抗肿瘤作用的物质包括海藻糖（3.16%）、山柰酚（0.11%）、原儿茶酸（0.25%）、丹酚酸B（2.11%）、金丝桃苷（0.18%）、虫草素（0.10%）、木犀草素（0.084‰）及水飞蓟宾（0.092%）。海藻糖、木犀草素、水飞蓟宾、虫草素及山柰酚可抑制K1细胞增殖（P<0.05），在受试浓度范围内海藻糖与山柰酚没有对HUM-CELL-0097细胞活力产生影响（P>0.05）。海藻糖及山柰酚抑制K1细胞增殖的IC50分别为120 mmol/L和110 μmol/L，IC50浓度的海藻糖及山柰酚处理K1细胞10 d，K1细胞的增殖克隆能力显著降低。使用0.5 IC50及IC50浓度的海藻糖及山柰酚处理K1细胞24 h，胞内Beclin-1及LC3Ⅱ蛋白表达增加（P<0.05），P62蛋白表达下降（P<0.05），均以IC50组变化最为明显，可见自噬小体形成。IC50海藻糖组Beclin-1、LC3Ⅱ、P62分别是对照组的1.35、2.06、0.42倍（P<0.05）；IC50山柰酚组Beclin-1、LC3Ⅱ、P62分别是对照组的1.60、1.96、0.28倍（P<0.05）。结论?夏枯草水提物中海藻糖与山柰酚可促进K1细胞自噬性死亡。