| EBV LMP2A逆转录病毒表达载体的构建及产毒细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 高玉,朱伟,王云,罗兵.EBV LMP2A逆转录病毒表达载体的构建及产毒细胞系的建立[J].青岛大学医学院学报,2007,43(4):289-291,295. |
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| 作者姓名： | 高玉 朱伟 王云 罗兵 |
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| 作者单位： | 青岛大学医学院微生物学教研室,山东,青岛,266021 |
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| 摘 要： | 目的构建含EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白基因2A（LMP2A）的逆转录病毒表达载体，筛选建立携带该基因的高滴度产毒细胞系。方法逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）扩增获取目的基因LMP2A，定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVpuro，形成重组质粒pMSCVpuro-2A，脂质体法将pMSCVpuro-2A转染逆转录病毒包装细胞PT67。嘌呤霉素筛选产毒细胞克隆，扩大培养产毒细胞克隆，收获病毒进行滴度测定，RT-PCR检测产毒PT67细胞目的基因的转录表达。结果限制性酶切、PCR及测序鉴定证实LMP2A正确插入逆转录病毒表达载体；筛选获得稳定产毒的抗性细胞克隆；收获病毒的滴度为3．2×10^7CFu／L，且重组腺病毒在PT67细胞能有效转录。结论携带LMP2A基因的重组逆转录病毒表达载体pMSCVpuro-2A构建成功，转染PT67细胞后包装出重组逆转录病毒，进而筛选获得了能转录表达LMP2A的产毒细胞系PT67-LMP2A。
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| 关 键 词： | 疱疹病毒4型 人 逆转录病毒 潜伏膜蛋白2A PT67细胞系 |
| 文章编号： | 1672-4488（2007）04-0289-04 |
| 修稿时间： | 2006-09-072007-02-02 |
CONSTRUCTION OF A RETROVIRAL VECTOR CARRYING LMP2A AND ESTABLISHMENT OF RECOMBINANT VIRUS PRODUCING CELL LINE |
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| GAO YU, ZHU WEI, WANG YUN, et al.CONSTRUCTION OF A RETROVIRAL VECTOR CARRYING LMP2A AND ESTABLISHMENT OF RECOMBINANT VIRUS PRODUCING CELL LINE[J].Acta Academiae Medicinae Qingdao Universitatis,2007,43(4):289-291,295. |
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| Authors: | GAO YU ZHU WEI WANG YUN |
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| Institution: | Department of Microbiology, Qingdao University Medical College, Qingdao 266021, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | herpesvirus 4 human retrovirus latent membrane protein 2A PT67 cell line |
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