犀角地黄汤合方含药血清调节ITP患者Teff/Treg分化及功能的研究#br#

目的　探究犀角地黄汤合方含药血清对免疫性血小板减少症（ITP）患者效应性T细胞（Teff）/调节性T细胞（Treg）分化的影响，并探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在其中的作用机制。方法　采用随机数字表法将20只大鼠分为含药血清组和空白血清组，每组10只，分别使用犀角地黄汤合方颗粒和蒸馏水连续灌胃3 d，收取2组大鼠全血制备含药血清和空白血清。收集健康志愿者和ITP患者外周血，提取外周血单个核细胞（PBMC），磁珠分选CD4+ T细胞，抗CD3/CD28抗体培养体系活化后，分为对照组、模型组和实验组。对照组为健康志愿者CD4+ T细胞，模型组及实验组为ITP患者CD4+ T细胞，实验组采用含药血清干预72 h，对照组及模型组采用大鼠空白血清干预72 h。流式细胞术检测各组CD4+ T细胞中Teff/Treg比例；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组培养上清液中白细胞介素（IL）-2、干扰素（IFN）-γ、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6、IL-17及Treg细胞因子转化生长因子（TGF）-β、IL-10水平；Western blot检测PI3K、Akt、mTOR蛋白及磷酸化蛋白水平。结果　CD4阳性率为（99.44±0.01）%。与对照组相比，模型组CD4+ T细胞中Teff细胞比例明显升高，Treg比例明显降低，Teff/Treg比值增大，IL-2、IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α水平以及PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白水平升高，TGF-β、IL-10、p-Akt蛋白水平降低（P＜0.05）；与模型组相比，实验组CD4+ T细胞中Teff细胞比例降低，Treg细胞比例升高，Teff/Treg比值减小，IL-2、IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α水平以及PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白水平降低，TGF-β、IL-10水平升高（P＜0.05）。结论　犀角地黄汤合方含药血清能够调节ITP患者Teff/Treg的分化及细胞因子的分泌，可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路PI3K、mTOR蛋白表达及其磷酸化水平有关。