| RNA干扰对乙型肝炎病毒复制的体外影响 |
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| 引用本文： | 王新宇,张继明,尹有宽,谢怡,黄玉仙,邬祥惠,翁心华.RNA干扰对乙型肝炎病毒复制的体外影响[J].世界华人消化杂志,2007,15(15):1688-1694. |
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| 作者姓名： | 王新宇 张继明 尹有宽 谢怡 黄玉仙 邬祥惠 翁心华 |
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| 作者单位： | 复旦大学附属华山医院传染病科/华山医院肝病中心,上海市,200040 |
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| 基金项目： | 上海市科技攻关计划项目，No．034119906~~ |
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| 摘 要： | 目的:通过一种能够在细胞内表达短发卡RNA的逆转录病毒载体来研究RNA干扰对乙型肝炎病毒复制的影响.方法:首先针对HBV基因组Pol基因RT区寻找RNAi的靶位,并设计相对应的寡核苷酸链.然后再将一对碱基配对寡核苷酸链退火后连接入载体形成重组的质粒,并进行鉴定.在Huh-7细胞中,将通过鉴定的干扰质粒与HBV复制型质粒pHBV3.8共转染,分别应用ELISA方法来检测HBV相关的抗原,应用Northern印迹检测HBV RNA,以及应用实时荧光定量PCR和Southern印迹检测HBV核心颗粒DNA.结果:研究通过计算机方法协助寻找了3条RNAi靶位,并且构建了相应的基于逆转录病毒载体的RNA干扰质粒154i、312i和734i.结果发现312i对pHBV3.8表达有明显的抑制,HBsAg和HBeAg分别为阴性对照组的39%和41%,差异均有显著性(P=0.001,P=0.000).定量荧光PCR结果显示312i组核心颗粒DNA水平显著低于阴性对照组(21.3%±1.1%vs 100.0%±10.6%,P=0.0046).Southern blot和Northern blot结果均显示,312i组病毒复制及mRNA转录水平最低(10.5%,12.0%).结论:在HBV基因组RT区找到了一个可用于RNAi的靶位,并且构建了相对应的干扰质粒,此质粒可成功地抑制HBV复制型质粒在细胞中的复制和表达.
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| 关 键 词： | 乙型肝炎病毒 RNA干扰 小发卡RNA 逆转录病毒载体 抗病毒治疗 |
| 收稿时间： | 2007-01-30 |
| 修稿时间： | 2007年1月30日 |
Inhibition of hepatitis B virus expression and replication by RNA interference |
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| Xin-Yu Wang,Ji-Ming Zhang,You-Kuan Yin,Yi Xie,Yu-Xian Huang,Xiang-Hui Wu,Xin-Hua Weng.Inhibition of hepatitis B virus expression and replication by RNA interference[J].World Chinese Journal of Digestology,2007,15(15):1688-1694. |
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| Authors: | Xin-Yu Wang Ji-Ming Zhang You-Kuan Yin Yi Xie Yu-Xian Huang Xiang-Hui Wu Xin-Hua Weng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis B virus RNA interference Short hairpin RNA Retrovirus vector Antiviral therapy |
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