从MAPKs信号通路探讨健脾通络方的消肿镇痛作用机制

目的 观察健脾通络方的消肿和镇痛作用，并初步探索其作用机制。方法 120只ICR小鼠，分为正常组、模型组、健脾通络方低、中、高剂量组（5、10、20 g·kg^-1）、阳性药塞来昔布组（0.03 g·kg^-1），每组10只，每天1次经口灌服，采用小鼠完全弗氏佐剂（CFA）诱导慢性炎性痛模型、二甲苯诱导耳肿胀实验、热板实验和乙酸扭体实验4种急、慢性模型观察不同剂量的健脾通络方的消肿和镇痛作用；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测慢性炎性痛小鼠血清和致炎足中前列腺素E₂（PGE₂）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测慢性炎性痛小鼠致炎足中水通道蛋白（AQP）1、AQP3、环氧化酶（COX）1、COX2、丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）家族的蛋白表达情况，探索健脾通络方的初步作用机制。结果 与正常组比较，二甲苯所致模型小鼠耳肿胀度显著升高，热板实验小鼠热缩足潜伏期缩短（P<0.01）；与模型组比较，健脾通络方能显著提高二甲苯所致小鼠耳肿胀度抑制率（P<0.05，P<0.01），延长小鼠乙酸致扭体潜伏期和减少扭体反应次数（P<0.05，P<0.01）。与正常组比较，慢性炎性痛小鼠足肿胀度显著升高，机械痛阈值降低同时冷敏痛阈值升高（P<0.05，P<0.01），致炎足中的AQP1和AQP3的蛋白含量增加，血清和（或）致炎足中IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE₂及致炎足COX2含量升高，致炎足p-p38 MAPK、p-JNK、p-ERK的蛋白表达水平升高（P<0.01）；与模型组比较，健脾通络方显著降低慢性炎性痛小鼠的足肿胀度、升高机械痛阈值并降低冷敏痛阈值，镇痛持续4 h，且给药后2 h为镇痛最佳时间点（P<0.05，P<0.01）；进一步，健脾通络方下调慢性炎性痛小鼠致炎足中AQP1和AQP3的蛋白含量，降低血清和（或）致炎足中IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE₂及致炎足COX2含量，但对COX1无明显影响，同时降低致炎足p-p38 MAPK、p-JNK、p-ERK的蛋白表达水平（P<0.05，P<0.01）。结论 健脾通络方具有消肿和镇痛作用，其机制与下调MAPKs信号通路抑制细胞因子和炎症介质产生有关，为其临床应用提供实验依据。