基于线粒体功能揭示《黄帝内经》“七七”理论内涵及高龄IVF-ET患者的中药干预机制

目的 研究不同年龄阶段女性卵巢颗粒细胞线粒体功能的变化及补肾中药二至天癸方对高龄妇女体外受精-胚胎移植技术（IVF-ET）结局的影响,从而验证《黄帝内经》“七七”理论的科学内涵。方法 收集山东中医药大学附属医院中西医结合生殖与遗传中心行辅助生殖技术的不孕症患者150例,按照《黄帝内经》“七七”理论分为三七、四七组（30例）,五七组（60例）和六七组（60例）,五七组和六七组采用随机数字+信封法分为对照组和中药组各30例,中药组自促排卵周期启动日给予二至天癸方至扳机日。观察各组之间的IVF结局,使用蛋白免疫印迹法（Western blot）测定各组卵巢颗粒细胞中线粒体融合蛋白1（Mfn1）、线粒体融合蛋白2（Mfn2）,线粒体分裂蛋白1（Drp1）的含量。结果 与三七、四七组比较,五七对照组和六七对照组患者获卵数、双原核（2PN）数、可用胚胎数、优质胚胎数、临床妊娠率和活产率均明显下降（P<0.05）,六七对照组鲜胚移植率明显下降（P<0.05）。与五七对照组比较,六七对照组患者患者获卵数、2PN数、可用胚胎数、优质胚胎数和临床妊娠率均明显下降（P<0.05）。与五七对照组比较,五七中药组患者获卵数、2PN数、可用胚胎数明显升高（P<0.05）;与六七对照组比较,六七中药组患者获卵数明显升高（P<0.05）。与三七、四七组比较,五七和六七对照组患者卵巢颗粒细胞中Mfn1和Mfn2蛋白表达明显降低,Drp1蛋白表达升高（P<0.05）;与五七对照组比较,六七对照组患者卵巢颗粒细胞中Mfn1和Mfn2蛋白表达明显降低,Drp1蛋白表达升高（P<0.05）。与五七对照组比较,五七中药组患者卵巢颗粒细胞中Mfn2蛋白表达升高,Drp1蛋白表达降低（P<0.05）;与六七对照组比较,六七中药组患者卵巢颗粒细胞中Mfn1和Mfn2蛋白表达升高,Drp1蛋白表达降低（P<0.05）。结论 随着年龄的增长,女性在“五七”后IVF结局预后变差,卵巢颗粒细胞中线粒体融合能力下降,而裂变增多,从线粒体功能验证了《黄帝内经》“七七”理论的内涵。二至天癸方可以调节高龄女性的卵巢颗粒细胞线粒体功能,提高Mfn1、Mfn2表达水平,促进线粒体融合,抑制Drp1而减少线粒体分裂,缓解年龄带来的卵巢功能减退,提高卵母细胞发育潜能,改善高龄女性的IVF结局,但对于“六七”之年的超高龄女性临床效果欠佳。

Mitochondrial Function Reveals Connotation of "Seven-Seven" Theory of Huangdi's Internal Classic and Mechanism of Herbal Intervention for Elderly Women Undergoing IVF-ET