基于PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬探讨当归四逆汤对痛风性关节炎大鼠的影响

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路，探讨当归四逆汤对痛风性关节炎（GA）大鼠自噬水平的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）和当归四逆汤低、中、高剂量组（6.54、13.08、26.16 g·kg^-1），每组10只，并分别给予相应药物灌胃，正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃，连续7 d。于第5天给药1 h后向各组（正常组除外）大鼠右侧踝关节注射尿酸钠混悬液（50 g·L^-1）建立GA模型，正常组注射等体积的无菌生理盐水。观察大鼠踝关节肿胀情况；测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β水平；观察踝关节病理形态变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测滑膜PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）、自噬效应蛋白（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt、mTOR、LC3、Beclin-1、p62 mRNA表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠关节肿胀指数显著升高（P<0.01），血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高（P<0.01），踝关节滑膜组织可见明显炎性细胞浸润和纤维组织增生，滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达显著升高（P<0.01），PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达显著升高（P<0.01），LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较，当归四逆汤中、高剂量组大鼠关节肿胀明显减轻（P<0.05）；血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达量显著明显降低（P<0.05）；踝关节滑膜组织未见明显炎性细胞浸润，纤维组织增生减轻；滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达量均明显降低（P<0.05），PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达量亦明显降低（P<0.05），而LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达量均明显上升（P<0.05）。结论 当归四逆汤可以抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路，提高大鼠滑膜组织自噬水平，改善痛风性关节炎，并且以高剂量效果最佳。

Danggui Sinitang Mitigates Gouty Arthritis in Rats by Regulating Autophagy via PI3K/Akt/mTOR Signaling Pathway