两步法体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为CD+34/Sca-1+造血干细胞的研究

目的　建立一种体外诱导胚胎干细胞 (embryonicstemcell,ESC)定向发育为CD 3 4 /Sca 1 造血干细胞 (hematopoieticstemcell,HSC)的实验方法。方法　联合应用血管内皮生长因子(vascularendothelialcellgrowthfactor ,VEGF)、干细胞因子 (stemcellfactor ,SCF)、白细胞介素 3(interleukin 3,IL 3)、白细胞介素 6 (interleukin 6 ,IL 6 )和促红细胞生成素 (erythropoietin ,EPO)分阶段首先诱导ESC形成富含CD 3 4 /Sca 1 细胞的胚胎体 (embryoidbody ,EB) ,然后分别观察EB细胞在甲基纤维素半固体培养体系和骨髓基质细胞饲养层培养体系中进一步分化为HSC的情况。结果VEGF联合其他细胞因子能有效促进EB中HSC的形成 ,CD 3 4 /Sca 1 细胞数高达 (13 72± 1 92 ) %。收获此阶段的EB进一步诱导发现 ,甲基纤维素培养体系造血克隆形成率明显低于骨髓基质细胞培养体系 ,在甲基纤维素中CD 3 4 /Sca 1 细胞数最高只能达到 (2 0 5 2± 2 78) % ,而基质细胞中CD 3 4 /Sca 1 细胞数可达 (34 6 0± 3 71) % (t=5 2 6 ,P <0 0 0 1)以上 ,且来自骨髓基质细胞培养体系的造血分化细胞在造血集落培养时能形成类型和数量更多的造血克隆。结论　使用VEGF联合SCF、IL 3、IL 6、EPO分阶段诱导ESC形成富含CD 3 4 /Sca

Generation of CD+34/ Sca-1+ cells from mouse embryonic stem cells with two-step differentiation in vitro