| 登革1型病毒NS1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 梅竹,邓永强,曹飞,于曼,朱舜亚,秦成峰,秦鄂德. 登革1型病毒NS1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 解放军医学杂志, 2010, 35(6) |
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| 作者姓名： | 梅竹 邓永强 曹飞 于曼 朱舜亚 秦成峰 秦鄂德 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家"十一五"传染病重大专项子课题 |
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| 摘 要： | 目的重组表达登革1型病毒NS1蛋白并制备多克隆抗体。方法通过RT-PCR扩增编码登革1型病毒NS1蛋白的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)后经酶切测序鉴定,获得重组质粒pET-NS1。进一步使用IPTG诱导表达,经免疫印迹鉴定后,采用蛋白浸提方法从SDS-PAGE胶中纯化回收融合蛋白,并通过透析对目的蛋白进行复性;纯化复性后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光法测定抗体效价。结果成功构建了高效表达登革1型病毒NS1蛋白的原核表达载体,表达的重组NS1蛋白占菌体蛋白总量的50%以上,以包涵体形式存在;免疫印迹表明表达的重组NS1蛋白能够为登革病毒兔抗血清识别,纯化后纯度可达95%以上;免疫小鼠后获得了效价1∶1000的抗登革病毒NS1蛋白的鼠多克隆抗体。结论原核表达的重组NS1蛋白具有良好的免疫原性,诱导产生的多克隆抗体能够有效识别天然NS1蛋白,为进一步研究登革病毒NS1蛋白及其抗体的生物学功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 登革热病毒 病毒非结构蛋白质类 重组表达 抗体 |
Prokaryotic expression of the NS1 protein of dengue virus type 1 and preparation of polyclonal antibodies |
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| MEI Zhu,DENG Yong-qiang,CAO Fei,YU Man,ZHU Shun-ya,QIN Cheng-feng,QIN E-de. Prokaryotic expression of the NS1 protein of dengue virus type 1 and preparation of polyclonal antibodies[J]. Medical Journal of Chinese People's Liberation Army, 2010, 35(6) |
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| Authors: | MEI Zhu DENG Yong-qiang CAO Fei YU Man ZHU Shun-ya QIN Cheng-feng QIN E-de |
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