siRNA沉默G6PD对人结肠癌细胞HIF-1α表达的影响 |
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引用本文: | 张德太,张科,杨文,胡丽华.siRNA沉默G6PD对人结肠癌细胞HIF-1α表达的影响[J].中国病理生理杂志,2011(8). |
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作者姓名: | 张德太 张科 杨文 胡丽华 |
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作者单位: | 华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科; |
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摘 要: | 目的:研究siRNA干扰葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因表达的LoVo细胞在低氧环境中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)水平的变化及其对低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法:构建靶向G6PD基因的siRNA干扰质粒载体,并转染人结肠癌细胞株(LoVo),用限制性内切酶法结合DNA测序鉴定特异重组子,RT-PCR检测G6PD mRNA表达,结合G6PD活性测定判断其干扰效率;以未转染LoVo细胞为对照,进一步观察G6PD沉默的瘤细胞在低氧环境下NADPH水平的变化,RT-PCR检测HIF-1αmRNA表达水平,West-ern blotting检测HIF-1α蛋白水平。结果:成功构建靶向G6PD的siRNA重组质粒载体并稳定转染LoVo细胞。与未转染组细胞相比,RNA干扰G6PD使mRNA表达下降43%,酶活性下降63.5%,细胞内NADPH水平显著下降(41%vs 100%,P<0.05),但HIF-1αmRNA表达水平无明显变化,而HIF-1α蛋白显著降低。结论:低氧环境下,G6PD基因可能通过下调NADPH水平从而降低HIF-1α的稳定性,导致其水平下降,进而影响肿瘤细胞的低氧...
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关 键 词: | siRNA 低氧诱导因子1α 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 LoVo细胞 |
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