| 慢病毒介导的shRNA对A549细胞Pin1表达的干扰作用 |
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| 引用本文： | 赵帅,董文斌,张婵,李清平,康兰,雷小平,郭琳,翟雪松.慢病毒介导的shRNA对A549细胞Pin1表达的干扰作用[J].细胞与分子免疫学杂志,2014(3). |
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| 作者姓名： | 赵帅 董文斌 张婵 李清平 康兰 雷小平 郭琳 翟雪松 |
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| 作者单位： | 泸州医学院附属医院新生儿科; |
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| 基金项目： | 中华儿科杂志第二届双鹤珂立苏科研基金(2010年);四川省教育厅科研基金(08ZA150);四川省卫生厅科研基金(90191) |
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| 摘 要： | 目的构建Pin shRNA慢病毒载体,建立稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)表达的A549细胞系。方法根据查阅文献获得Pin1shRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体,随后转入人胚肾HEK293T细胞中,收集其上清进行病毒滴度测定,再行慢病毒的包装,将获得的慢病毒毒液感染A549细胞。通过实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测Pin1在不同组的表达抑制情况。结果经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体质粒,包装并得到高滴度的病毒颗粒。通过qRT-PCR和Western blot法检测显示,与对照组相比,pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体感染的A549细胞中Pin1的表达在mRNA和蛋白水平均有所下降。结论慢病毒介导的shRNA能够有效下调A549细胞中Pin 1的表达。
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| 关 键 词： | 肽基脯氨酰顺反异构酶(Pin) 慢病毒载体 A细胞 基因表达 |
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