| 鸡肺表面活性蛋白A的表达及其多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 刘红梅,王浩,邵颖,黄博言,周秀红,潘玲,王桂军,祁克宗.鸡肺表面活性蛋白A的表达及其多克隆抗体的制备[J].细胞与分子免疫学杂志,2014(1). |
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| 作者姓名： | 刘红梅 王浩 邵颖 黄博言 周秀红 潘玲 王桂军 祁克宗 |
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| 作者单位： | 安徽农业大学动物科技学院; |
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| 基金项目： | 安徽省教育厅自然科学基金重点项目(KJ2012A112) |
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| 摘 要： | 目的表达鸡肺表面活性蛋白A(cSP-A)重组蛋白,并制备鼠抗cSP-A多克隆抗体。方法人工合成cSP-A的凝集素糖识别区(CRD)基因(cSP-A-CRD),亚克隆到pGEX-6P-1载体中进行原核表达,对表达产物进行鉴定。切胶纯化法纯化重组蛋白,并免疫小鼠制备抗cSP-A多克隆抗体,ELISA检测抗体效价,Western blot法、免疫荧光组织化学染色和ELISA鉴定该抗体的特异性和适用范围。结果获得鼠抗cSP-A血清,效价达到105;Western blot法结果表明多抗血清具有良好的特异性和反应性,并可用免疫荧光组织化学技术检测鸡肺上皮细胞表达的cSP-A和用间接ELISA检测鸡肺灌洗液中存在的水溶性cSP-A蛋白。结论成功表达了cSP-A重组蛋白并制备了小鼠抗cSP-A多克隆抗体。
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| 关 键 词： | 鸡肺表面活性蛋白A 糖识别区 原核表达 多抗 |
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