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| 基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株的构建及鉴定 | |
| 作者姓名： | 王静 康喜龙 焦扬 熊丹 宋丽 杨芸 潘志明 焦新安 |
| 作者单位： | 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室;禽类预防医学教育部重点实验室; |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(31172299);教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目(NCET-12-0745);江苏省第四期“333工程”第三层次培养对象项目;江苏省第九批“六大人才高峰”高层次人才项目(NY-028);江苏省高校“青蓝工程”中青年学术带头人项目(2012年度);教育部创新团队基金(IRT0978);江苏省优势学科建设工程(2010年) |
| 摘 要： | 目的构建基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株。方法以H5N1禽流感病毒血凝素(HA)基因和鼠伤寒沙门菌SL7202基因组为模板,通过重叠PCR扩增出HA1-2-fljB基因片段,将其插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,再将其转化表达菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达。SDS-PAGE和Western blot法鉴定分析融合蛋白HA1-2-fljB。通过刺激HEK293-TLR5细胞,检测融合蛋白的TLR5生物学活性。结果正确构建出重组质粒pET32aHA1-2-fljB,SDS-PAGE显示,融合蛋白HA1-2-fljB相对分子质量(Mr)约为100 000,Western blot法表明融合蛋白具有良好的免疫反应性。TLR5生物活性实验结果显示,与HA1-2蛋白刺激组相比,HA1-2-fljB诱导HEK293-TLR5细胞分泌了高水平的IL-8(P0.01)。结论成功表达出具有TLR5活性的融合蛋白HA1-2-fljB,为研究H5亚型禽流感新型疫苗奠定了基础。 |
| 关 键 词： | H亚型禽流感 鞭毛蛋白 血凝素 原核表达 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |