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| 施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析 | |
| 作者姓名： | 张永宁 吴绍强 Kerstin WERNIKE 吕继洲 冯春燕 林祥梅 |
| 作者单位： | 中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所;德国弗里德里希洛弗勒研究所; |
| 基金项目： | “十二五”国家科技支撑计划课题(2013BAD12B01);国家质检总局科技计划项目(2013IK054);中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金(2012JK011) |
| 摘 要： | 目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBVN免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性。结果筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应。结论成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具。 |
| 关 键 词： | 施马伦贝格病毒 核衣壳蛋白 原核表达 单克隆抗体 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |